扶正解毒微粉与扶正解毒散体外抗IBDV药效对比试验

张传津， 陈炳见

(1. 山东省兽药质量检验所， 山东 济南 250022 ；2. 山东亚康药业股份有限公司， 山东 潍坊 261101)

超微粉碎是近20 年迅速发展起来的一项高新技术，用于中药领域能把原材料加工成微米甚至纳米级的微粉。 中药经超微粉碎所得到的超细粉末，其比表面积显著增大，药物在胃肠道里的溶解度明显增加，从而增加药物的生物利用度，并加快药物起效时间[1]。 此外，由于纳米或微米粒的粘附性及小的粒径，既有利于延长局部用药时滞留性的增加，也有利于延长药物与肠壁接触时间，加大接触面积，从而提高药物口服吸收的生物利用度[2]。 扶正解毒散为《中华人民共和国兽药典》(2015 版二部)收载普通散剂处方，由黄芪、板蓝根和淫羊藿三味中药按一定比例组合而成的成方制剂，具有扶正祛邪、清热解毒的功效，主用于治疗鸡法氏囊病[3-4]。本试验用鸡胚体外验证该处方粗粉与超微粉两种剂型的抗病毒活性效果差异，为扶正解毒微粉治疗鸡传染性囊病的药理作用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验药物的准备及试验用鸡胚 扶正解毒微粉(300 目)和扶正解毒散(80 目)由山东亚康药业股份有限公司提供。 按照药物重量和水重量1 ∶25，100 ℃密闭浸泡1 h，然后把含有药渣的药液离心取上清，减压浓缩至4 g/mL，使用前按净含量用生理盐水稀释成2000 g/mL 的药液扶正解毒散微粉和扶正解毒散(FZC 和FZ)，充分溶解后，0.22 μm 的微孔滤膜过滤除菌，4 ℃保存备用。

SPF 鸡胚为山东绿都生物科技有限公司馈赠。

1.2 病毒准备 鸡传染性囊病中等毒力活疫苗，山东滨州沃华生物工程有限公司产品，规格：1 000 羽/瓶；批号：130916。 用生理盐水溶液稀释成5 羽份·mL-1，接种10 日龄SPF 鸡胚尿囊膜，0.2 mL/枚，37 ℃孵育168 h 后收取尿囊膜及胚体；尿囊膜及胚体研磨反复冻融后用生理盐水做10 倍稀释经离心后再接种SPF 鸡胚尿囊膜，剂量同上，168 h 后收取尿囊膜及胚体研磨反复冻融后，10 倍稀释经离心上清液按Karber 法[3]测定传染性囊病病毒的ELD50 为10 -5.64/0.1 mL。 -20 ℃冻藏备用。

1.3 扶正解毒微粉和扶正解毒散药液对SPF 鸡胚安全浓度测定 将2 种药液分别用生理盐水从4 000 g/mL 连续的2 倍比稀释5 个浓度后，设生理盐水对照，接种10 日龄SPF 鸡胚尿囊膜，0.2 mL/枚，每个浓度接种6 枚SPF 鸡胚，37 ℃孵育168 h。对无出现鸡胚死亡且鸡胚发育正常有活力的最大药物浓度为作为最大安全浓度。

1.4 扶正解毒微粉和扶正解毒散药液抵抗IBDV效果的测定 将各药液与传染性囊病病毒液等比混合使药物终浓度为500、250、125 g/mL3 个浓度，设生理盐水传染性囊病病毒混合液对照，在37 ℃共同培育1 h 后，接种10 日龄SPF 鸡胚尿囊膜，0.2 mL/枚，每个浓度接种6 枚SPF 鸡胚，37 ℃孵育168 h，按Karber 法[3]测定各病毒混合液的ELD50，计算病毒滴度。

1.5 传染性囊病病毒与中药液共育后病毒滴度变化 与未加药共育的病毒对照组比较，传染性囊病病毒经与扶正解毒散微粉和扶正解毒散药液共育后病毒滴度降低。 同一种药物其高浓度组的传染性囊病病毒滴度低于低浓度组。 扶正解毒微粉和扶正解毒散在同一浓度时，扶正解毒微粉组传染性囊病病毒滴度低于扶正解毒散组(表2、表3、图1)。

2 结果

各药液对SPF 鸡胚的安全浓度：各药业从500 μg/mL 开始接种的鸡胚全部存活，且发育和活力与对照组比较为正常，所以可将它们的最大安全浓度定为500 μg/mL(表1)。

表1 各种药液接种鸡胚后鸡胚死亡和活力情况

表2 传染性囊病病毒与药液共育后的ELD50 变化

表3 传染性囊病病毒与药液共育后的病毒滴度变化

图1 传染性囊病病毒与药液共育后的病毒滴度变化

3 讨论

本试验结果表明，在所选浓度范围内由扶正解毒微粉和扶正解毒散制备溶液都可以降低病毒滴度值，且高浓度中药效果优于低浓度中药；同浓度扶正解毒微粉效果优于扶正解毒散。 表明扶正解毒微粉和扶正解毒散均具有抗病传染性囊病病毒感染鸡胚的能力，并且扶正解毒散微粉效果优于扶正解毒散。

本试验结果表明扶正解毒微粉药液与传染性囊病病毒共育后的病毒滴度低于扶正解毒散药液与传染性囊病病毒共育后的病毒滴度，原因可能是微粉可以增加单位中药或复方中中药成分的溶出。黄一帆等[5]用高效液相色谱检测了黄连解毒微粉和黄连解毒散中黄芩苷的含量，发现前者黄芩苷含量高出后者51.23%；张国祖等研究发现，100 ℃浸泡的扶正解毒微粉和扶正解毒散中淫羊藿苷前者比后者高出115%[6]。

4 结论

扶正解毒微粉体外具有很好抗病毒作用，且效果明显优于扶正解毒散。 因此，扶正解毒微粉可以作为防治鸡病毒病新兽药进一步研究开发。