健脾益气通络中药对糖尿病肾病大鼠肾组织nephrin、CD2AP基因表达的影响

（云南省中医医院 云南 昆明 650021）

李琼锋 王宫林（通讯作者） 韦衮政 赵义

糖尿病肾病是糖尿病比较常见的一种全身微血管相关并发症，带来比较大的危害[1]。对糖尿病肾病开展健脾、益气及通络治疗能获得良好效果。本文主要研究将健脾益气通络中药应用于糖尿病肾病大鼠模型中对其肾组织nephrin、CD2AP基因表达的影响作用。

1.材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

选取60只健康雄性SD大鼠，均为SPF级，大鼠体重是200g到250g，由昆明楚商科技有限公司提供。

1.1.2 试剂及仪器

健脾益气通络中药包含黄芪30g、白术20g、党参20g、茯苓20g、泽兰20g、丹参20g、水蛭6g。试链脲佐菌素（由美国Sigma公司提供）。Trizol试剂（由美国Invitrogen公司提供）。西药选用洛汀新（盐酸苯那普利片，10mg/片，北京诺华制药有限公司制造）。逆转录试剂盒（由加拿大MBI Fermentas公司提供）。DNA纯化试剂盒、CD2AP、nephrin、β-actin试剂和相关引物（均由上海生工生物工程技术服务有限公司提供）。PCR循环仪（由英国horhnoHybaid公司提供）。

1.2 实验动物分组

60只SD大鼠饲养一周后通过背部切口开展左肾切除手术，两周之后随机抽10只为左肾切除组，剩余大鼠在其腹腔将STZ注入，72小时之后经尾静脉抽血检测血糖，若血糖检测值大于等于16.7mmol/L则评定为模型构建成功。剩余大鼠随机分成糖尿病肾病模型组、r一组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组，一组收入10只，洛汀新组大鼠予以0.9mg/kg.d实施灌胃处理，糖尿病肾病+中药低剂量组大鼠予以5.29mg/kg.d健脾益气通络中药实施灌胃处理，糖尿病肾病+中药中剂量组大鼠予以5.29mg/kg.d健脾益气通络中药实施灌胃处理，糖尿病肾病+中药高剂量组大鼠予以21.16mg/kg.d健脾益气通络中药实施灌胃处理，左肾切除组、糖尿病肾病模型组予以等量的生理盐水实施灌胃处理，每天进行1次灌胃，持续灌胃6周。

1.3 RT-PCR检测nephrin、CD2AP基因表达情况

开展30个RT-PCR循环，将扩增得到长度是192bp的片段，将产物置于2℃下储存。之将产物在1.5%的琼脂糖凝胶上点样开展电泳实验，半小时之后于紫外光灯下面对结果进行观察和判定。

1.4 统计学分析

数据采取统计学软件（SPSS21.0版本）开展验证，nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值表示为均数±标准差（±s）的形式，开展t检验，P＜0.05，出现数据检测统计学意义。

2.结果

2.1 六组大鼠一般情况分析

左肾切除组神状态良好，饮食正常，动作敏捷，反应灵敏，毛色光泽，肌肉丰满，尿量正常，没用死亡情况。将STZ注入之后，五组大鼠均多食、多饮及多尿，大鼠的精神较为萎靡，大鼠的反应较为迟钝等。治疗期间均有死亡情况，其中中药低剂量、高剂量组各死亡3只，中药中剂量、洛汀新组各死亡2只，模型组死亡4只。

2.2 对比和分析六组大鼠肾组织nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值

糖尿病肾病模型组的nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值与左肾切除组对比均降低，P＜0.05，各个治疗组的nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值与糖尿病肾病模型组对比都增加，P＜0.05，出现数据检测统计学意义。

表1 六组大鼠肾组织nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值对比和分析

3.讨论

糖尿病肾病是糖尿病相对常见的并发症，容易引发出现终末期的肾衰竭现象，而糖尿病肾病患者出现蛋白尿与其肾小球的滤过屏障损害存在一定关系[2]。

nephrin是于裂孔膜上面特异表达的跨膜蛋白，为裂孔膜蛋白复合体的重要组成成分，糖尿病肾病初期出现比较肥大的肾小球与nephrin表达量比较低及蛋白尿存在一定的关系，而CD2AP于肾小球的足细胞以及肾小管的上皮细胞中均可表达，nephrin和CD2AP组成脂筏样的结构及功能相关复合体而对裂孔膜相关结构以及功能完整性进行维持[3]。本文相关数据展示，糖尿病肾病模型组的nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值与左肾切除组对比均降低，P＜0.05，呈现数据检测统计学意义，其他各组没有呈现数据检测统计学意义（P＞0.05）。各个治疗组的nephrin吸光度测定值、CD2AP吸光度测定值与糖尿病肾病模型组对比都增加，P＜0.05，呈现数据检测统计学意义。

综上所述，对糖尿病肾病大鼠模型予以健脾益气通络中药治疗可促使nephrin、CD2AP基因表达明显增加。

[1]丁海华,邱原野,王盈盈,等.小檗碱对糖尿病肾病大鼠nephrin、podocin和α3β1整合素表达的影响[J].中国药理学通报,2015(10):1414-1420.

[2]邓顺有,黄赐平,叶颖霞,等.活血降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞相关分子蛋白表达的影响[J].中国医院药学杂志,2016,36(14):1167-1173.

[3]王雁秋,黄平,邓旻,等.绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠nephrin、VEGF表达及肾功能的影响[J].浙江中西医结合杂志,2015(1):17-19,108.