Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用

张 曼，韩 飞，高 睿，何亚鹏(杨凌职业技术学院 动物工程分院，陕西杨凌 712100)

禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAV)是一种无囊膜的双链DNA病毒，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3群，Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus group Ⅰ，FAV Ⅰ)具有共同的群抗原[1-2]。该群病毒代表株为鸡胚致死孤儿病毒(Chicken embro lethal orphan virus，CELOV)[3]。近年来，由FAV Ⅰ引起的包涵体肝炎、心包积液综合征和砂囊糜烂的感染呈上升趋势[2,4-6]。特别是2015年6月以来，中国多个省份的鸡群爆发安卡拉病(Angrara disease)，病原为Ⅰ群FAV中C种FAV-4型，该病主要特征为突然倒地，出现呼吸道症状，甩鼻、呼吸加快，排黄色稀粪，有神经症状，两腿划空，剖检可见心包积液、肝脏肿大[5-6]。该病主要发生于3周龄的肉鸡，发病后1周左右为死亡高峰期，死亡率可达20%～80%，短时间内就给禽类养殖造成重大损失[7]。此外，腺病毒既可经卵垂直传递，污染鸡胚，也可经排泄物水平传播，给防控带来巨大的困难[1]。对FAV Ⅰ传统的实验室诊断方法如分离与鉴定、中和试验、琼脂糖凝胶免疫扩散试验等方法费时耗力，结果不够精确，PCR、LAMP等对试剂和设备要求较高且不便对大量样品进行检测[7-9]，酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)作为经典的、应用最广的血清学诊断方法，具有操作简便、特异性强、敏感性高和成本低廉等优点，可以为Ⅰ群禽腺病毒疫苗免疫效果检测和未免疫鸡群的疾病诊断提供方法[10]。

六邻体蛋白Hexon是FAVⅠ的主要结构蛋白，位于FAVⅠ的外壳，Hexon蛋白含有主要的属和亚属特异性抗原决定簇和次要的种特异性抗原决定簇，可以作为诊断抗原[3]。本研究分析FAVⅠHexon基因编码蛋白的抗原指数和表面分布可能性，选择Hexon蛋白……