含HOE642的新型器官保存液对离体兔肺移植供肺细胞凋亡的影响*

余得水，龚添庆，周文琴，郑剑桥，刘 斌△

(1.四川省宜宾市第二人民麻醉科 644000；2.四川大学华西医院麻醉科，成都 610068)

如何减轻缺血再灌注肺损伤是目前肺移植研究中迫切需要解决的临床问题[1]。以低钾葡聚糖(low potassium dextran,LPD)液为代表的细胞外液型供肺保存液在肺移植后早期肺功能保护方面已表现出极大优势[2]。在现有LPD液基础上，有针对性地加入某些具有保护作用的活性物质，以提高供肺保存效果是目前肺保护研究热点[3]。本课题组前期研究证实1型钠氢通道(Na+-H+Exchangers 1，NHE1)特异性抑制剂HOE642能够减轻兔离体心肌的缺血再灌注损伤[4]。因此，本实验拟比较含HOE642的新型器官保存液与LPD液对肺移植供肺细胞凋亡的影响，以深入探讨新型器官保存液减轻供肺缺血再灌注损伤的具体机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 健康雄性新西兰大白兔24只，体质量2.0～2.5 kg，购自四川大学实验动物中心[SCXK(川)2009-09]。

1.1.2试剂与仪器 HOE642由德国Aventis Pham公司惠赠；原位末端凋亡(TUNEL)检测试剂盒(Roche公司,美国)；单克隆Fas/Fas-L一抗，兔多克隆Bcl-2/Bax一抗，二氨基联苯胺(DAB)显色剂(Sigma公司，美国)；单克隆抗体β-actin(Santa Cruz公司，美国);多功能真彩色细胞图像分析管理系统(Image-Pro Plus,Media Cybernetics,美国)。

1.2方法

1.2.1新型器官保存液的制备 将固体粉末型NHE1特异性抑制剂HOE642溶于含有已配制好的LPD液的容量瓶中，调整HOE642的浓度为50 μmol/L，玻璃棒充分搅拌30 min，使固体溶剂充分溶解。用氢氧化钠(NaOH)调整pH值至7.2～7.6，并用50 μm微孔过滤器滤去不溶残渣，便得到无菌的新型器官保存灌洗液，密封后放于4 ℃冰箱内保存备用。

1.2.2动物分组 24只成年雄性新西兰大白兔分2组，LPD液组(LPD组)和新型器官保存液组(HOE组)，每组12只，每次实验需要2只，分别作为肺移植的供体兔和受体兔。……