MEK1/2抑制剂PD98059对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护机制及对LOX-1表达影响*

孙 珊，胡红玲，段晓宇，吴钦钦，贺映侠，卜晓芬，明小燕，严凤琴，朱 虹

(华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院综合二科,武汉 430022)

氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对内皮细胞、平滑肌细胞等有毒性作用，能够破坏细胞完整性，损坏内皮细胞的屏障保护功能[1-4]。低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)能够与ox-LDL特异性结合促进一系列信号通路的激活，诱导内皮细胞发生炎性损伤[5]。干扰LOX-1的表达可以通过激活RhoA/Rho信号来抑制ox-LDL引起的内皮细胞损伤[6]。在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中抑制MEK1/2信号通路可以显著降低脂多糖诱导的细胞损伤[7-8]。本研究应用ox-LDL诱导HUVEC产生损伤，探究PD98059抑制MEK1/2信号通路是否可以通过调节LOX-1的表达以抑制ox-LDL对HUVEC产生的损伤，现报道如下。

1 材料与方法

1.1细胞和试剂 人HUVEC株购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)，DMEM高糖培养基及胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自美国Gibco公司，四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)干粉和二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)购自美国Sigma公司，MEK抑制剂PD98059购自美国Invivgon公司，MEK1/2抗体购自美国Cell signaling technology公司，LOX-1抗体(ab126538)、RhoA抗体(ab54835)、ROCK1抗体(ab45171)和ROCK2抗体(ab71598)购自英国Abcam公司，RNA提取试剂Trizol裂解液和反转试剂盒PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)购自中国大连Takara生物公司，蛋白浓度测定BCA试剂盒购自武汉Bio-swamp公司，RIPA蛋白裂解试剂盒购自中国碧云天生物公司，聚肌苷酸购自中国辰玺生物科技公司；一氧化氮(NO)检测试剂盒购自碧云天生物公司，ELISA试剂盒购自武汉Bio-swamp公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养和分组 HUVEC培养于含10% FBS的DMEM高糖培养基中，置于5% CO2的37 ℃培养箱中孵育；然后使用0.3%的胰酶消化并进行传代培养，以对数生长期细胞作为实验材料分为阴性对照组(普通培养基培……