铜绿假单胞菌PA0745基因突变株的构建及鉴定

卢培林，刘 利，熊 霞

(西南医科大学附属医院皮肤科，四川泸州 646000)

铜绿假单胞菌是一种革兰阴性需氧菌，普遍存在于土壤、水、空气和多种动物体内，具有较强的环境适应性和耐药性，可引起泌尿系统、呼吸系统和消化系统感染等，是慢性皮肤溃疡创面感染最常见的细菌。尤其在合并有基础疾病或免疫力低下时，如患有艾滋病、糖尿病和癌症等，病死率将大大增加。此外，由于铜绿假单胞菌耐药性强、耐药谱广，对多种抗菌药物表现出天然或获得性耐药，可供选择的有效抗菌药物很少。因此，从根本上寻找新的抗铜绿假单胞菌感染途径具有重大意义[1-2]。

研究显示，铜绿假单胞菌耐药性的产生与生物膜的形成息息相关。其中，临床分离的铜绿假单胞菌PA14细胞株可产生一种扩散信号分子(diffusible signal factor,DSF)类的小分子化合物顺式-2-癸烯酸(cis-2-decenoic acid，CDA)，CDA可有效扩散PA14细胞株形成的生物膜，增强铜绿假单胞菌的致病性和耐药性。相关研究表明，烯酰辅酶A水合酶/异构酶是CDA合成过程的关键酶[3-6]。当PA0745基因功能受到抑制时，CDA合成受阻，铜绿假单胞菌菌膜扩散能力减弱，致病性下降。当外源性加入CDA时，菌膜运动能和细菌侵染力又得以恢复。另有研究表明，PA0745基因结构中有两个保守的谷氨酸残基对行使其催化功能具有重要意义，他们分别是α3上的Glu126和α4上的Glu146[7-9]。本研究利用同源重组的原理构建 PA0745基因点突变株E126A、E146A和基因缺失株ΔPA0745，通过生长曲线测定和细胞侵染实验初步验证了PA0745基因对铜绿假单胞菌致病性的影响。……