微小RNA⁃758⁃3p在舌鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响

王瑾 张梅君 李云峰 廖立凡湖北省第三人民医院口腔科（武汉430030）；西安交通大学口腔医学院、陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室（西安70004）

舌鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一，常伴有早期淋巴结转移，恶性程度高［1］。基因水平的治疗已成为舌鳞状细胞癌研究的重要方向［2］。微小RNA（miRNA）是一类长度约为20～25个核苷酸的小分子非编码RNA，可引起下游基因mRNA的降解或抑制其翻译，调控细胞增殖、凋亡、衰老等生物学行为［3-4］。miR⁃758⁃3p是近年来新发现的miRNA，对miR⁃758⁃3p的研究报道较少。已有研究证实，miR⁃758⁃3p可在肝癌和宫颈癌中发挥肿瘤抑制作用［5-6］。本研究拟通过转染miR⁃758⁃3p至舌鳞状细胞癌细胞株，探讨miR⁃758⁃3p在舌鳞状细胞癌中的作用机制及对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI1640培养基、DMEM⁃F12、高糖DMEM、DK⁃SFM和胎牛血清（FBS）购于美国Gibco公司。人舌鳞状细胞癌细胞株CAL27、HNl3、SCC15、TSCCA和人正常口腔黏膜细胞HOK购于中国科学院上海细胞生物所。Trizol试剂、反转录试剂盒和转染试剂LipofectamineTM2000试剂盒购于美国Invitrogen公司。引物购于南京金斯瑞公司。miR⁃758⁃3p 模拟物、miR⁃NC）、TRIM44野生型质粒（TRIM44⁃WT）和 TRIM44突变型质粒（TRIM44⁃MT）购于上海汉恒生物科技有限公司。双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于美国Pro⁃mega公司。一抗均购于美国BD公司。MTT试剂盒购于上海碧云天生物技术研究所。Transwell小室购于美国Corning公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养和转染 CAL27细胞培养在10%FBS的高糖DMEM培养基，HNl3和TSCCA细胞培养在10%FBS的RPMI 1640培养基，SCC15细胞培养在10%FBS的DMEM⁃F12培养基，HOK细胞培养在DK⁃SFM培养基，培养条件为37℃、5%CO2的培养箱。取生长状态良好的TSCCA细胞接种到6孔板中，待细胞融合度达到60%～70%时，按照LipofectamineTM2000试剂盒说明书，将miR⁃NC（对照组）或miR⁃758⁃3p（实验组）分别转染至TSCCA细胞。……