人源性乙酰胆碱受体α亚基胞外肽段的原核表达与血清学诊断研究

许胜杰，孙卫国，陈玉萍，王中魁，陶晓勇，王卫

解放军第三〇九医院 a.神经内科；b.全军结核病防治重点实验室，结核病诊疗新技术北京市重点实验室；北京 100091

重症肌无力（myastheniagravis，MG）是一种自身免疫性疾病，机制为血清中大量生成的乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor，AchR）抗体与AchR结合，导致AchR生理功能低下，引发肌肉疲乏无力症状[1]。目前在我国人群中MG发病率较高，早发现及时治疗对改善预后具有重要意义。研究表明，血清中AchR抗体滴度与MG的病情密切相关，通过检测患者血清中AchR抗体水平可以对MG患者进行初步临床诊断和病情评估。神经肌肉接头处突触后膜的AchR是一个由4种亚基构成的五聚体跨膜蛋白，其中α亚基上存在众多抗原表位，AchR特异性T细胞及B细胞表位几乎均存在于α亚基上，α亚基有望作为抗原用来检测MG患者血清AchR抗体[2]。α亚基是一个具有4个跨膜区域的跨膜蛋白，其胞外域可用于免疫吸附、免疫动物制备实验性重症肌无力动物模型。我们构建了AchR的α亚基胞外氨基酸即第1～221位氨基酸（aa）序列的融合表达载体pETNusA-AchR-α，原核表达获得融合蛋白NusAAchR-α，纯化重组蛋白后进行血清学鉴定，对重组蛋白用于MG患者血清学诊断的价值进行评估，探讨开发临床检测MG试剂盒的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料

临床阳性血清来自本院神经内科住院MG患者200例；健康人血清来自本院体检中心60例；大肠杆菌BL21（DE3）、质粒pET-NusA由本室保存；全基因和引物由华大基因公司合成；限制性内切酶HindⅢ和XhoⅠ、T4DNA连接酶购自NEB公司；TaqDNA聚合酶和dNTP购自天根生化生物公司；……