不同产地菊花质量研究△

杨朝帆，董诚明，邢冰，夏伟，田亚杰

(河南中医药大学，河南 郑州 450046)

菊花为菊科菊属多年生草本植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序，有散风清热、平肝明目、清热解毒的功能，临床上用于治疗风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花、疮痈肿毒[1]。菊花作为药食两用植物，在我国已有3000多年的栽培历史[2]，因其产地变迁、加工方法的改进等，逐渐形成了不同的商品和规格，有杭白菊、毫菊(小毫菊)、大马牙(大毫菊)、贡菊、滁菊、怀菊等[3]，其中以杭菊、亳菊、滁菊、怀菊最为有名，有“四大名菊”之称[4]。目前，国内外学者已经对菊花的产地变迁、栽培、遗传育种、类型之间的质量比较、药理作用等方面进行了大量研究，其活性成分主要有黄酮、绿原酸、挥发油等类成分，影响其质量的因素涉及品种、栽培条件、采收时间、产后加工、炮制和贮存等[5-7]。2015年版《中华人民共和国药典》(《中国药典》)一部中，菊花药材按产地及加工方法不同，分为“亳菊”“杭菊”“滁菊”“怀菊”“贡菊”。《中国药典》以绿原酸、木犀草苷及3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸为检测指标进行含量测定。本文通过对市场上流通的不同规格的杭菊、亳菊、滁菊、怀菊进行绿原酸、木犀草苷、槲皮素、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸以及总黄酮含量的检测，并对主要化学成分进行比较分析，以期探讨菊花内在化学成分之间的关联性，从而进一步为菊花质量评价提供依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

样品为市场流通的药用菊花，经河南中医药大学董诚明教授鉴定为菊花ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序，具体样品信息见表1。

表1 收集的菊花样品信息表

1.2 仪器与试剂

UV-3200S型紫外可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)；Waters 2596 型高效液相色谱仪。

对照品绿原酸(纯度≥98%，批号：110753-200413)、槲皮素(纯度≥ 98%，批号：100081-200907)、木犀草苷(纯度≥98%，批号：720-200905)和芦丁(纯度≥98%，批号：100080-9303)均购于中国食品药品检定研究院；3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品(纯度≥ 98%，CAS号码：2450-53-5)购于四川维克奇生物科技有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 水分测定

参照《中国药典》2015版通则0832第二法进行测定[1]。

2.2 总黄酮含量的测定

参考刘利军等[8]的实验方法测定总黄酮含量。

2.2.1 对照品溶液制备 精密称定芦丁对照品5.1 mg，置25 mL锥形瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含芦丁0.204 mg的溶液，即得。

2.2.2 标准曲线的制备 精密量取204 μg·mL-1的芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于10 mL带刻度试管中，各加入5%的亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.3 mL，摇匀，放置6 min，4%的氢氧化钠2 mL，加70%乙醇定容至刻度，摇匀，放置10 min，在510 nm波长处测定吸光度，以芦丁含量为横坐标，吸光度为纵坐标做线性回归，回归方程为Y=12.436X-0.001 6，r=0.999 8，表明芦丁在0～0.816 mg吸光度与芦丁含量呈良好的线性关系。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取1 g过五号筛的菊花粉末，于具塞磨口锥形瓶中，加入70%乙醇30 mL，60 ℃水浴0.5 h，取出抽滤，洗涤，置100 mL的容量瓶，70%乙醇定容至刻度，精密量取3 mL于10 mL容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，静置备用。

2.2.4 含量测定 精密量取供试品溶液2 mL于10 mL带刻度的试管中，以不加供试品为空白对照，照2.2.2进行测定。

2.3 绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、槲皮素的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Xaqua C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈(A)-0.2%磷酸(B)，梯度洗脱，程序见表2；检测波长：348 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。对照品及供试品溶液色谱图见图1。

表2 菊花中4种化合物检测的流动相梯度洗脱程序表

注：A.对照品溶液；B.供试品溶液；1.绿原酸；2.木犀草苷；3.3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸；4.槲皮素。图1 混合对照品及菊花样品HPLC图

2.3.2 混合对照品溶液的制备 精密称取绿原酸4.62 mg、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸3.06 mg、木犀草苷1.46 mg、槲皮素3.46 mg，于10 mL量瓶中，用70%甲醇水溶解并稀释至刻度，摇匀，4 ℃密封避光保存，备用。

2.3.3 供试品溶液制备 精密称取菊花粗粉0.5 mg，置具塞锥形瓶中。精密加入70%甲醇水50 mL，称量。超声处理40 min，补足失重。摇匀，取续滤液，用微孔滤膜(0.22 μm)滤过，备用。

2.3.4 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL，按2.3.1色谱条件测定，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线，得到相应回归方程，见表3。

表3 绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、槲皮素的标准曲线及线性范围

2.3.5 样品含量测定 吸取各菊花供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定[9]，即得。

3 结果与分析

3.1 含量测定结果

由表4含量测定结果可以看出，不同产地菊花样品在总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量上存在显著差异。菊花样品中总黄酮质量分数为6.67%～12.41%，其中以样品5和样品1较高，即江苏射阳产杭菊和安徽滁州产滁菊含量较高，分别为12.41%、10.49%，样品4即安徽亳州产杭菊的总黄酮含量较低，为6.67%；绿原酸含量以样品5即江苏射阳产杭菊绿原酸含量较高，为1.10%；样品6即浙江桐乡杭菊绿原酸含量较低，为0.52%；木犀草苷含量以样品6即浙江桐乡产杭菊含量较高，为0.54%；样品4即安徽亳州产杭菊的木犀草甘含量较低，为0.15%；3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量以样品1即安徽滁州滁菊含量较高，为3.83%；而样品4和6即安徽亳州产杭菊和浙江桐乡产杭菊较低，分别为1.37%、1.38%；槲皮素含量以样品8即河南武陟产白怀菊较高，为0.22%；而样品6和7即浙江桐乡产胎菊和杭菊较低，为0.03%、0.02%。

表4 不同产地菊花中总黄酮及4种化学成分的含量测定结果 %

注：同列数据不同小写字母表示差异有统计学意义(P<0.05)；同列数据相同小写字母表示差异无统计学意义(P>0.05)。

3.2 相关性分析

利用SPSS 19.0软件，选择Pearson相关系数对各化学成分进行双侧t检验相关性分析，结果见表5。

表5 总黄酮、绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、槲皮素含量的相关性分析表

注：*P<0.05水平(双侧)上显著相关。

由表5可以看出，菊花样品中绿原酸含量与总黄酮含量呈显著正相关，但与木犀草甘、槲皮素等黄酮类化学物质含量没有明显的相关性，同时与同为酚酸类的3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量也没有明显相关性。而木犀草苷含量与其他成分含量均呈负相关，由于样本量较小，无统计学意义。

3.3 变异系数权重法的综合评价

在综合评价中，权重系数是评价的关键，权重系数法可分为主观的专家咨询权数法，以及客观的因子分析权数法、独立性权数法和信息量权数法[10]。主观定权需要对指标进行打分，具有较强的主观影响，而本实验根据表征评价指标特征值之间的差异性，选客观的因子分析权数法，其变异系数越大，权重越大。选取指标中的总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量进行综合评价。具体计算步骤如下：

(1)

根据公式(1)可得变异系数为：

式中：C1～C5分别代表总黄酮含量、绿原酸含量、木犀草苷含量、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量、槲皮素含量。

根据变异系数(δi)，按公式(2)计算权重系数(Ai)，按公式(3)计算综合得分(Wi)。

(2)

(3)

式中：Xi为第i项指标的指标值。

由最终得分可知，样品综合得分为M1>M5>M2>M3、M7> M8、M9>M6>M4，即滁菊(安徽滁州)>杭菊(胎菊，江苏射阳)>亳菊(大亳菊)>亳菊(小亳菊)、杭菊(浙江桐乡)>怀菊(白，河南武陟)、怀菊(黄，河南武陟)>杭菊(胎菊，浙江桐乡)>江苏杭菊(亳州引种)。安徽滁州的滁菊综合评价得分较高，为2.18，较其他地区菊花质量佳；而由亳州引种的江苏杭菊综合评价得分较低为1.16，较其他地区菊花质量差。

4 讨论

按《中国药典》进行含量测定时是按照样品的干燥品进行计算的；本文进行水分测定，是为总黄酮、绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、槲皮素的含量计算时扣除水分，使所有样品在同一水平下进行含量比较，使实验结果更为严谨。

本实验在对结果进行分析时，先对菊花的各检测指标进行相关性分析，进而采用变异系数加权法进行综合分析。权重系数往往决定了数据的最终综合评分，权重系数一般分为主观和客观两种，主观是指专家咨询权数法，客观包括独立性权数法、分析权数法和信息量权数法。本实验选定信息量权数法进行权重系数的确定。采用加权平均法，将总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量设为评价菊花的5个条件来评价菊花样品的质量，各样品质量排序为滁菊(安徽滁州)>杭菊(胎菊，江苏射阳)>亳菊(大亳菊)>亳菊(小亳菊)、杭菊(浙江桐乡)>怀菊(白，河南武陟)、怀菊(黄，河南武陟)>杭菊(胎菊，浙江桐乡)>江苏杭菊(亳州引种)。滁菊(安徽滁州)样品得分最高，滁菊的总黄酮质量分数为 10.49%、绿原酸质量分数为0.90%、木犀草苷质量分数为0.23%、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸质量分数为3.83%、槲皮素质量分数为0.16%，较其他样品质量佳。本文研究结果与滁菊为“四大药菊”之首[11]的报道结果相一致。从菊花的总黄酮、绿原酸、木犀草苷、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸、槲皮素含量测定结果看，不同产地、不同品种菊花的5种成分含量差异较大，可能与种植、采收、产地加工、环境、土壤、气候等因素有关，有待进一步考察研究。

在本实验质量排序中，杭菊(胎菊，江苏射阳)>杭菊(浙江桐乡)> 杭菊(胎菊，浙江桐乡)>江苏杭菊(亳州引种)的结果也与索风梅等[4]的“杭菊和亳菊对生态环境的要求相对较高”这一观点相一致。药材具有一定的道地性，同种异地种植的药材，江苏杭菊(亳州引种)与亳菊(亳州)、杭菊(浙江、杭州、江苏)在质量上有明显差异，表明药材要遵循其道地性原则及其产地适宜性原则[4]。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：310-311.

[2] 邵清松，郭巧生.药用菊花道地药材形成源流考[J].时珍国医国药，2009，20(7)：1751-1752.

[3] 王珊，李友连，苏靖，等.中国药用菊花品种及加工方法变迁的研究[J].中国药学杂志，2017，52(7)：539-542.

[4] 索风梅，陈士林，余华，等.中国四大名菊的产地适宜性研究[J].世界科学技术—中医药现代化，2011，13(3)：332-339.

[5] 白晓艳.采收期对药用菊花产量与质量的影响[J].河北林业科技，2015(3)：10-11.

[6] 郭巧生，汪涛，程俐陶，等.药用菊花不同栽培类型总黄酮动态积累研究[J].中国中药杂志，2008，33(11)：1237-1239.

[7] 覃珊.产后加工、采收期和花序不同部位对菊花质量影响的研究[D].济南：山东大学，2011.

[8] 刘利军，于艳，时维静，等.安徽省3种药用菊花总黄酮含量比较[J].安徽科技学院学报，2012，26(4)：47-50.

[9] 于艳，时维静，邓家胜，等.菊花中7种化合物HPLC检测方法的建立[J].安徽科技学院学报，2012，26(5)：43-48.

[10] 杜真辉，董诚明，熊玉萍，等.菌肥与复合肥组合对地黄产量及品质的影响[J].作物杂志，2016(4)：146-149.

[11] 陈世勇，李英峰，史亚东，等.滁菊低产原因分析及对策[J].安徽农业科学，2011，39(10)：5784-5785.