上饶市献血人群JK（a-b-）表型筛查及分子生物学特征分析

何辉，沈有华

(上饶市中心血站，江西 上饶 334000)

Kidd血型系统是人类血型系统之一，决定该血型系统分型的抗原称为Kidd抗原或Jk抗原，分为Jka、Jkb、Jk3三种抗原。存在4种表型为Jk（a+b－）、Jk（a－b+）、Jk（a+b+）和一种罕见的表型 Jk（ab－），也称为JKnull。Kidd血型基因编码产物为尿素通道蛋白，Jk（a－b－）表型个体红细胞可以耐受2mol/L的尿素溶液30min内完全不溶血，而其他的表型约3min内出现完全溶血[1－4]。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2016年3月至2017年5月上饶市中心血站献血者血液筛查标本38483例。

1.2 仪器与试剂 分析纯尿素 （上海展云化工公司，批号 20150915），单克隆抗－JKa、抗－JKb（法国DIAGAST，批号448000）。RSP100全自动加样仪（瑞士帝肯公司），KA2200台式离心机 （日本久保田株式会社）。

1.3 红细胞尿素溶血实验 采用RSP100全自动加样仪，取12μl压积红细胞，用600μl生理盐水配成2%的红细胞悬液。在120孔OLYMPUS微孔板上，每孔先加入20μl红细胞悬液，再加入2mol/L的尿素溶液。振荡混匀，室温放置30min。肉眼观察结果，溶血者阳性，不溶血者为阴性。

1.4 JK（a－b－）血清学确认实验 标本红细胞用生理盐水洗涤3遍配成2%的红细胞悬液。采用盐水试管法检测红细胞上的JKa、JKb抗原，单克隆抗JKa、JKb 试剂各 50μl，再加入 50μl 2%的红细胞悬液，3000r/min离心15s，肉眼观察结果，凝集者阳性，不凝集者阴性。

1.5 Kidd血型测序和序列分析 委托上海血液中心进行对表型为 Jk（a－b－）的献血者的Jk基因编码外显子进行PCR扩增，并测定序列。与GenBank收录的Kidd血型基因各外显子的核苷酸序列比对。

2 结果

2.1 JK（a－b－）初筛和血清学确认实验 38483 份血液筛查标本中有1份标本未出现溶血，其余均出现溶血，进行血清学实验，确认为JK（a－b－）血型，分布频率约为0.0025%。

2.2 JK（a－b－）测序 对 Kidd 基因第 6 和第 9 外显子测序结果显示，该献血者为JKB/JKB纯合子，JKB基因第5内含子剪切位点突变AG＞AA （纯合突变），见图 1。……