不同临床标本实时荧光定量PCR诊断结核分枝杆菌的检出率差异探究

张燊璐 肖盼盼

【摘 要】目的：探讨不同临床标本实时荧光定量 PCR诊断结核分枝杆菌的检出率差异。方法：2014年8月～2017年7月，随机选择我院收治的疑似结核病患者219例作为研究对象，收集其呼吸道、体液标本，进行荧光定量PCR检测，观察对比不同类型临床标本检出率情况。结果：经由实验室诊断确诊为肺结核患者67例，其中支气管灌洗液检检出率为54.76%（23/42），支气管刷物检出率为38.46%（15/39），尿液检出率为27.91%（12/43），痰液检出率为21.05%（8/38），胸腔积液检出率为17.14%（6/35），腹腔积液检出率为13.64%（3/22），各标本之间检出率对比差异存在统计学意义，P<0.05。结论：在结核分枝杆菌诊断过程中，实时荧光定量 PCR诊断具有较高的应用价值，且不同临床标本检出率存在明显差异，临床诊断操作应有所侧重。

【关键词】结核分枝杆菌；实时荧光定量 PCR诊断；标本；检出率

【中图分类号】R521 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）04-0-02

结核病属全球范围内高发疾病，日渐成为威胁人类健康的主要公共卫生问题，我国为结核病高发区，结核病发病人数众多，严重威胁我国居民身体健康[1]。针对结核病患者早诊断早治疗意义重大，而常规实验室诊断阳性率较低，很难满足临床实际需求，因此找寻一种高效、便捷的诊断方式尤为重要，其中实时荧光定量 PCR诊断优势明显，为后续治疗提供有效依据。本次研究基于上述背景，探讨了不同临床标本实时荧光定量 PCR诊断结核分枝杆菌的检出率差异，现详述如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年8月～2017年7月，随机选择我院收治的疑似结核病患者219例作为研究对象，年龄28～62岁，平均（45.64±2.37）岁，收集其呼吸道、体液标本，其中支气管灌洗液42例，支气管刷物39例，尿液43例，痰液38例，胸腔积液35例，腹腔积液22例。本次研究经由我院伦理委员会批准，上述患者临床资料齐全，且全部自愿参与。

1.2 检测方法

样本采集：支气管灌洗液、支气管刷物、腹腔积液、胸腔积液：严格遵守临床操作规定，由同一医师操作完成；尿液：给予患者无菌试管，要求其留取中段尿液；痰液：患者晨起需漱口，用力咳嗽，咳出气管深处痰液，收集于无菌袋盖标本盒中。

样本检测：全部标本行实时荧光定量PCR检测，使用我院实时荧光定量PCR仪检测，试剂由广州东盛生物科技有限公司提供，DNA提取过程严格按照试剂说明操作，循环要求：93℃ 30s，55℃45s，设定30个循环；93℃ 2min，55℃60s，设定10个循环。

1.3 观察指标

阳性判断标准：Ct值小于30则判断为阳性，参考阳性结果计算各项指标检出率。

1.4 统计学处理

采用SPSS24.0统计软件对本次数据进行分析处理，计数资料以例数（率）表示，卡方检验。对比有统计学意义参照P<0.05。

2 结果

确诊为肺结核患者67例，支气管灌洗液检出人数最多为23例，检出率为54.76%，支气管刷物检出15例，检出率为38.46%，尿液检出12例，检出率为27.91%，痰液检出率8例，检出率为21.05%，胸腔积液检出6例，检出率为17.14%，腹腔积液检出人数最少为3人，检出率为13.64%，各标本之间检出率对比差异存在统计学意义，P<0.05。

3 讨论

现阶段，我国结核病发病率较高，其属呼吸道传染疾病，由结核分枝杆菌引起，主要经由血液或淋巴传播，到达肺外脏器后致病，严重影响患者身体健康，且近年来我国肺结核发病人数不断增加，对临床诊治工作提出了较高要求[2]。

通常情况下，结核病患者多开展实验室结核分枝杆菌诊断，但传统检查方式敏感性较低，且特异性较差，无法满足临床诊断实际需求，临床日渐重视 检测方式的创新与发展，而实时荧光定量PCR诊断具有操作简便、可重复操作、全封闭扩增等优势，日渐被广泛应用于结核病患者诊断中，为后续治疗提供了科学的依据[2]。本次研究选择疑似肺结核患者作为研究对象，给予其实时荧光定量PCR诊断，对不同临床标本检出率差异进行了对比分析，结果显示：确诊为肺结核患者67例，其中支气管灌洗液检检出率为54.76%（23/42），支气管刷物检出率为38.46%（15/39），尿液檢出率为27.91%（12/43），痰液检出率为21.05%（8/38），胸腔积液检出率为17.14%（6/35），腹腔积液检出率为13.64%（3/22），各标本之间检出率对比差异存在统计学意义，P<0.05。具体原因分析如下：支气管灌洗液、支气管刷物检出率较高，二者源于深部病灶，经由支气管镜直接收集，其中细菌浓度较高，切实提高了诊断阳性率。而尿液、痰液、腹腔积液和胸腔积液均来源于脱落的病灶，会出现细菌浓度降低等问题，从而影响检测的准确性，因此针对肺结核患者，在实时荧光定量PCR诊断过程中，工作人员明确各项样本的特异性和敏感性，制定综合检查方案，以此切实提高临床诊断准确性，为临床治疗提供科学依据。

综上，在结核分枝杆菌诊断过程中，实时荧光定量 PCR诊断具有较高的应用价值，且不同临床标本检出率存在明显差异，临床诊断操作应有所侧重。

参考文献：

刘小文，欧阳冬英.实时荧光定量PCR检测痰中结核分枝杆菌临床评价[J].中国现代医药杂志，2014，16（1）：24-26.

孙京涛，孙丽娜.实时荧光定量 PCR法分析结核分枝杆菌对异烟肼耐药的分析[J].临床肺科杂志，2016，21（9）：1650-1652.

孟凤珍，郭铭，周立，等.TaqMan实时荧光定量PCR检测动物组织中结核分枝杆菌的研究[J].中国病原生物学杂志，2016，29（9）：769-774.