Beclin 1和P53在宫颈癌中的表达意义及其与预后的关系

张欣宁，吴海燕，刘永珠，姚书忠

(1.广东省清远市人民医院妇科，广东 清远 511500；2.中山大学附属第一医院妇科，广东 广州 510080)

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，其发病率位居妇科恶性肿瘤之首，虽然大部分患者经手术及术后辅助化疗，病情能获得缓解，但因远处转移率及复发率较高，导致其5年生存率仍不容乐观。恶性肿瘤的发生是一个复杂的过程，目前认为与原癌基因激活及抑癌基因失活有关。目前的研究认为，Beclin 1是一种抑癌基因，具有调控细胞自噬活动的作用，在多种恶性肿瘤中均已证实表达下调[1]。而突变型 P53基因抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，在恶性肿瘤的发生、发展中也发挥重要作用[2]。目前关于两者在宫颈癌的表达及预后相关的研究较少，因此，本研究通过观察Beclin 1和P53在正常宫颈组织、宫颈癌组织中的表达及与预后的关系，探讨其两者在宫颈癌发生、发展中的作用以及对预后的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1.1一般资料：收集清远市人民医院2010年1月～2012年12月的宫颈组织切片92例，切片前均未接受放疗、化疗治疗。试验组为含有完整随访资料的子宫颈鳞癌72例，按组织分化程度：高分化33例，中低分化39例。按国际妇产科联盟(FIGO，2000)分期标准：Ⅰ期32例，Ⅱa期40例，其中29例有盆腔淋巴结转移。对照组为正常宫颈标本20例，患者年龄32～70岁，中位年龄48岁。所有组织标本均使用甲醛固定后石蜡包埋切片，染色采用免疫组化SP法。

1.2结果判断方法：Beclin l和P53阳性表现均为细胞核中出现棕黄色颗粒。采取400倍光镜，随机观察5个高倍视野，每视野计数200个细胞。按照阳性细胞所占百分比与染色深度进行评分：无阳性细胞数为0分，阳性细胞数<30%为1分，阳性细胞数>30%为2分。染色深度评分：无染色0分；淡黄色1分；黄色至棕黄色3分；染色强度介于1分与3分之间为2分。总评分为阳性细胞百分比评分和染色深度评分之和，≤1分为阴性(-)，2～4分为弱阳性(+)，≥5分为阳性(++)，其中弱阳性和阳性均按阳性计数。所有标本均由两名高年资病理医师诊断。

1.3统计学方法：数据资料采用SPSS17.0统计软件进行分析。计数资料使用χ2检验，生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线，多因素生存分析采用COX回归分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1宫颈癌组织中Beclin 1和P53蛋白的表达结果：光镜下显示，Beclin 1免疫组化阳性反应物定位于细胞膜或细胞质内，而P53阳性反应物定位于细胞核，均表现为淡黄、棕黄和棕褐色颗粒。正常宫颈组织普遍着色，呈片状分布。宫颈癌中，Beclin 1的阳性表达为45.8%，显著低于正常宫颈组织，而P53的阳性表达为87.5%，显著高于正常宫颈组织。见表1。

表1Beclin1和P53在不同宫颈组织中的表达情况[例(%)]

组别例数Beclin-1阳性情况P53阳性情况正常组织2017(85.0)1(5.0)宫颈癌组织7233(45.8)63(87.5)P值0.0040.000

2.2Beclin 1和P53的表达与宫颈癌临床病理因素的关系：统计分析显示，Beclinl 1的阳性率与患者年龄、癌灶大小、FIGO分期和肿瘤侵犯肌层的深度无关(P>0.05)，而与肿瘤的分化程度、有无合并淋巴结转移相关。Beclin 1在33例高分化的宫颈癌组织中的阳性表达为21例，阳性率63.6%，在39例中低分化组织中阳性表达为12例，阳性率为30.8%，两组比较差异均有统计学意义(χ2=6.51,P=0.01)；Beclin 1在29例合并淋巴结转移患者中阳性表达为8例，阳性率27.6%，43例无淋巴结转移患者中阳性表达25例，阳性率58.1%，两组比较差异具有统计学意义(χ2=5.33,P=0.02)。P53的阳性率与患者年龄、癌灶大小、FIGO分期、有无淋巴结转移以及肌层浸润深度无关(P>0.05)，仅与肿瘤组织的分化程度相关。P53在33例高分化宫颈癌组织中阳性表达为25例，阳性率75.8%，在39例中低分化宫颈癌组织中阳性表达38例，阳性率97.4%，两组比较差异具有统计学意义(χ2=5.83,P=0.02)。

2.3Beclin l和P53的表达与宫颈癌患者预后的关系：本研究入选72例宫颈癌患者均具有完整的随访资料，随访率100%，截至最后一次随访(2017年12月)，随访时间60～95个月，共计死亡19例(26.4%)，5年生存率为73.6%。经检验发现，Beclin 1阳性患者生存时间显著长于阴性患者，差异具有统计学意义(P=0.011)。P53阳性表达患者生存时间与阴性表达患者差异无统计学意义(P=0.326)(见图1)。通过单因素生存分析显示，早期宫颈癌的生存时间与临床分期、组织分化程度、淋巴转移、肿瘤大小和Beclin 1表达相关(见表2)。经Cox回归分析，显示组织分化程度、淋巴转移以及Beclin 1的表达是早期宫颈癌的预后独立因素。见表3。

图1 Beclin1和P53的生存曲线比较

表2宫颈癌各临床参数与患者预后的单因素生存分析

临床参数例数死亡(例)5年生存率(%)P值年龄 ≤50岁36877.8 >50岁361169.40.683临床分级 Ⅰ级32487.5 Ⅱ级401562.50.042组织分化程度 高分化33390.9 中低分化391659.00.016淋巴结转移 有291644.8 无43393.00.002肌层浸润深度 <1/231680.6 ≥1/2411368.30.022肿瘤大小 <4 cm43588.4 ≥4 cm291451.70.001Beclin 1表达 阳性33487.9 阴性391561.50.011P53表达 阳性631871.4 阴性9188.90.723

表3宫颈癌患者5年生存率的COX回归多因素生存分析

预后因素BSEWaldExp(B)95% CIP值组织分化程度0.5120.2374.6211.5831.074～2.6360.026淋巴转移0.8330.3266.3012.2581.187～4.2950.013Beclin 11.3330.5635.6043.7491.258～11.4420.018

3 讨论

肿瘤的发生通常被认为是一个多因素、多步骤的过程，不仅是细胞增殖和分化异常性疾病，同时也是凋亡异常性疾病，研究已发现有多种抑癌基因在恶性肿瘤的生长周期中起重要作用。自噬是真核细胞特有的生命现象，是细胞降解受损的细胞器和大分子物质的一个过程。生理水平的自噬可以清除老化的细胞器，稳定细胞内环境，同时，自噬可以主动性诱导细胞死亡，对细胞的繁殖、分化起重要的调控作用。Beclin 1基因能通过调节自噬活性调控肿瘤的发生、发展，是哺乳动物参与自噬活动的特异性基因，其表达强度与自噬活性密切相关[3]。

本研究表明，Beclin 1在宫颈正常组织以阳性表达为主，而在宫颈癌中的表达为阴性和弱阳性,提示宫颈癌中存在Beclin 1的表达缺失和下调。通过临床病理特征的对比，发现Beclin l的表达阳性率与宫颈癌的组织分化程度(P=0.01)和淋巴转移(P=0.02)相关，差异具有统计学意义(P<0.05)，而与临床分期、病理类型以及宫颈肌层浸润深度、肿瘤大体类型等无相关性(P>0.05)。研究结果亦与前期的研究结果相符合[4]。这个结果说明Beclin 1的表达阴性或下调不仅是宫颈癌的早期事件，而且可能在宫颈癌的发生、发展中起重要作用，与肿瘤的恶性程度、转移与侵袭能力相关，提示Beclin 1可以作为评估预后的指标。通过对随访资料的进一步研究，发现临床分期、肿瘤的分化程度、淋巴结转移、癌灶大小和Beclin 1表达均与生存时间相关，其中Beclin 1阳性患者生存时间显著长于阴性患者，经COX多因素回归分析后表明，仅临床分期、组织分化程度和Beclin 1表达是影响患者生存时间的独立预后因素。Beclin 1表达缺失会提示预后不良，可能与两方面有关，一方面Beclin 1表达与肿瘤的组织分化和淋巴转移有相关性，而后两者均被认为与宫颈癌的预后密切相关，另一方面，研究表明宫颈癌细胞对化疗药物紫杉醇耐药，机制与Beclin 1表达缺失、细胞自噬功能被抑制有关，Beclin 1阴性患者预后不良可能与化疗的疗效不理想有关[5]。

目前检测的P53多为野生型P53突变而来，具有致癌特性，能够促进肿瘤的侵袭、转移、繁殖和细胞存活[6]，已有早期的研究证实P53与多种恶性肿瘤密切相关。本试验的研究结果可看出，在宫颈癌组织中P53表达的总阳性率比宫颈正常组织显著上升，P53的表达率跟年龄、临床分期、淋巴转移以及是否深肌层浸润无关，而与宫颈癌组织分化程度有关。说明野生型P53的突变是肿瘤发生的早期事件，其对宫颈癌细胞的凋亡作用减弱或消失，从而导致癌细胞无限制生长，肿瘤细胞的过度增殖，最终导致肿瘤的发生。对于P53对宫颈癌的预后评估价值，目前尚存有争议。本研究显示，P53不是宫颈癌的预后独立因素，与Stiasny的研究结果符合[7]。而陈晓露的研究则认为，宫颈癌患者中P53表达阳性者5年生存率显著下降，为预后独立因素，提示预后不良[8]。造成研究结果不同的原因一方面可能与研究的样本范围不同有关，本研究入选病例均为早期宫颈癌，临床分期不均衡，生存率为73.6%，而陈晓露的研究包含了Ⅲ～Ⅳ期，生存率仅为47.97%，另外可能也与本研究中P53阴性样本较少有关。

综上所述，在宫颈癌组织中，P53表现为过表达，与肿瘤的发生和分化密切相关，为宫颈癌的早期事件，自噬蛋白Beclin 1则表达缺失，且与肿瘤的发生、发展及预后相关。其中Beclin1表达缺失者5年生存时间缩短，为宫颈癌预后独立因素，对于后期的治疗方案制定及评估预后具有一定的指导意义。