WT-51A农残测仪检测中应注意的事项及数据分析

张碧玲

（陕西省泾阳县农产品质量安全检验监测站，陕西 泾阳 713700）

1 试剂配制

缓冲溶液：烧杯中依次加入试剂、蒸馏水（500毫升），之后将烧杯置于室温保存；底物：向标有“底物”的试剂瓶中加3.1毫升蒸馏水溶解，混匀备用，为避免试剂瓶温度过低，应降低放入0～5℃的冰箱冷藏；酶试剂：处于溶液状态的酶试剂应用时，应坚持在常温状态应用，避免温度过低。向标有“酶试剂”的试剂瓶中加入3.1毫升的缓冲溶液，混匀备用，需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷冻结冰；显色剂：显色剂已配制成溶液，从冰箱取出恢复到常温后直接使用。需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷冻结冰。

需要注意的是，配制缓冲溶液时，边倒水边搅拌，防止试剂结块，不停搅拌，直到试剂全部溶解。加热会使溶解加快，但会影响检测结果。没有蒸馏水的，可用纯净水代替，矿泉水、自来水等不能代替，配制酶试剂时，轻摇使之溶解，不能剧烈震摇。

2 样品制备

称取2克果蔬样品放入三角瓶中，用移液枪加入10毫升缓冲溶液后，放入振荡器中震荡2分钟，其中，所选果蔬样品的叶菜应顺着叶缘剪成宽度为1厘米的菜样，块根采取1厘米左右的表皮样品。没有振荡器的，可用手顺着一个方向轻轻摇动，力度不要太大，心里默数120下即可。

3 样品测定

首先，对照测试。取酶100微升，缓冲液2.5毫升，加入比色皿中，再加显色剂100微升，放置10分钟，加底物100微升，摇匀后立即放入仪器的比色池中，按对照键进行对照检测，对照后△A在3分钟的吸光值在0.3～0.8之间就可选用。然后，样品测试：取得测液2.5毫升，取酶100微升，加入比色皿中，再加显色剂100微升，静置10分钟，加底物100微升，摇匀立即放入仪器的比色池中，按样品键进行检测，反应180秒，出结果。最后，结果判定。抑制率，阴性，为合格样品；40%＜抑制率＜50%，为可疑样品；抑制率≥50%，阳性，为不合格样品。

抑制率(%)=[（△A-△At）/△A]×100%；△A—对照3分钟的吸光值，△At—样品3分钟的吸光值。注意事项：缓冲液和样品的比例是1∶5，即称取1克样品，就加5毫升缓冲液，取称2克样品，就加入10毫升缓冲液，必须是同比例的；样品测定跟对照测定是同一过程，即做对照静置多长时间，做样品同样也静置多长时间；当温度较高时，酶反应速度变快，加入酶液和显色剂后静置的时间可以相对短点，具体时间应以胆碱酯酶空白对照测试3分钟的吸光值变化而定。

当温度高时，酶反应速度快，可将仪器的反应时间调至1分钟，做空白对照时，测试1分钟的吸光度△A在0.15～0.3之间即可往下操作；待测样品加入底物后，应快速摇匀放入仪器的比色池中，否则会影响数据准确性；平时应该保持比色皿的清洁，使比色皿有好的透光度，做检测时，用手拿比色皿的磨沙面，比色皿长期使用透光面就不太清洁，可用乙醇清洗，确保比色皿透光面透亮；微量移液枪专用，最好贴上标签，使用时应先润洗，用完后应调到最大量程量放置，吸取试剂时坚持只吸出，不能放回的原则，防止试剂污染；切记做检测时必须是同批试剂，即生产日期相同、配制时间相同，任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才能使用新的，防止变质。

4 数据分析