Atg5在肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠纹状体和脑干中表达降低

刘金梦，管英俊*，陈燕春，刘永新，王巧真，周风华，王箐

（潍坊医学院，1临床医学院，2麻醉学系，潍坊 261053）

肌萎缩侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）是一种慢性进展性神经退行性疾病，特征是皮层、脑干和脊髓等运动神经元的选择性和进行性退化，临床上出现进行性肌无力、肌萎缩，最后导致呼吸衰竭而死亡[1]。许多类型的神经退行性疾病都伴随着聚集的和泛素化蛋白的积累，自噬参与了聚集蛋白的降解和去除，自噬受到抑制会导致中枢神经系统的神经退行性疾病[2]。超氧化物歧化酶1（superoxide dismutase 1, SOD1）基因突变与ALS发病密切相关[3]。研究表明，突变的SOD1聚集体会减弱溶酶体的逆向转运，在ALS早期出现进行性自噬溶酶体缺陷与清除受损[4]。本实验室前期经实验证明SOD1G93A突变的ALS转基因小鼠脊髓中多种自噬相关因子表达水平异常，如TFEB、beclin1、Atg4B[5,6]、Atg5[7]。Peng等[8]的研究也表明自噬相关基因Atg5在自噬体形成中十分重要。ALS脊髓自噬的研究很多，但对于纹状体和脑干神经元的研究尚不明确。本研究应用SOD1G93A基因突变的ALS转基因小鼠检测Atg5在ALS转基因小鼠纹状体和脑干中的表达变化，以探究自噬与ALS的关系，为从自噬角度系统阐明ALS发病机制提供实验依据。

材料和方法

1 实验动物

SOD1G93A基因突变的ALS转基因小鼠，购自Jackson实验室。将4w的小鼠剪尾0.2～0.4cm，按吴欣等方法[9]进行基因型鉴定。将成年ALS转基因小鼠根据发病早期（95d）、中期（108d）和晚期（122d）随机分为3组，每组ALS转基因小鼠配以同窝野生型（wide-type, WT）小鼠作为对照。

2 实验试剂及仪器

Atg5兔单克隆抗体购自Cell Signaling公司，β微管蛋白III（β-tubulin III）小鼠多克隆抗体购自R&D，鼠抗GAPDH单克隆抗体购自Proteintech Group公司，反转录试剂盒购自TOYOBO公司，SYBR Premix Ex TaqII购自Takara公司；……