豨桐凝胶膏剂临床前主要药效学研究

梁瑞芝

痹症,中医认为是风寒湿热之邪气引起的以肢体关节疼痛酸楚、麻木重着以及活动障碍为主的临床痛症［1-3］。本研究探讨将传统古方中成药豨桐丸制成豨桐凝胶膏剂,对尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎及其抗炎作用方面的影响。报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 50只实验动物SD健康雄性大鼠,体重180～220 g,由中山大学实验动物研究中心提供,动物合格证号为SCXK(粤)-2017-0070。所有大鼠适应性喂养1周后开始试验。另取健康雄性大鼠40只。

1.2 药物与试剂 豨桐凝胶膏剂为本院自制外用制剂的一种,采用凝胶化技术,用两味药材豨莶草和臭梧桐提取、精制、成型。秋水仙碱(西双版纳药业有限责任公司,国药准字 H53021369,批号150801)。醋酸泼尼松片(浙江仙琚制药有限公司,批号030715)。尿酸钠晶体制备［2］,取尿酸4 g溶于预热至60℃的800 ml双蒸水中,用0.5 mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液调节pH 至8.9,4℃冰箱过夜。4000 r/min离心收集沉淀即为尿酸钠晶体。高压灭菌,烘干后备用。

1.3 动物分组和造模 ①将50只SD健康雄性大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、高剂量组、低剂量组,各10只。每组动物实验提前5 d分别给药,高剂量组大鼠给予豨桐凝胶膏剂30 g/kg,低剂量组大鼠给予豨桐凝胶膏剂6 g/kg,均涂抹在大鼠足跖关节,连续涂抹7 d。阳性组大鼠给予秋水仙碱4 g/kg灌胃,用药7 d,空白组不给药。用6号注射针在受试大鼠右侧踝关节背侧从45°方向插入肌腱内侧,将0.2 ml尿酸钠溶液注入模型组、高剂量组、低剂量组、阳性组,造成急性痛风性关节炎模型。②另将40只健康雄性大鼠随机分为对照组、阳性A组、高剂量A组、低剂量A组,各10只。每组动物实验前5 d分别给药,对照组不给药,后三组给药分别同上述阳性组、高剂量组、低剂量组。用记号笔在大鼠右后肢关节周围作一标记,按毛细管放大法测定每只大鼠右后足体积2次,取平均值为各鼠给药前正常值。给各组大鼠再给药1次,30 min后给各组中每只大鼠(包括对照组)右后足足跖皮下注射0.1%蛋清0.1 ml致炎,分别在致炎30、60、120 min后测量右后足体积,给药前后足跖体积之差为肿胀度。

1.4 观察指标 观测大鼠体毛、活动、饮食、排便情况。五组大鼠在造模前、造模后、治疗后分别测试受试关节的体积,观察大鼠足跖关节肿胀度。比较四组大鼠致炎30、60、120 min后足肿胀度。

1.5 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般情况 空白组、高剂量组、低剂量组大鼠毛皮光滑,精神均佳,饮食、大小便正常,眼、鼻无分泌物,黏膜无充血。呼吸、心跳正常,体重增长在正常范围内。阳性组和模型组自发活动减少,倦卧不动,个别大鼠出现紧张不安,反应迟钝。模型组大鼠摄食及饮水次数也明显减少,局部关节皮肤温度增高,活动明显减少。

2.2 大鼠足跖关节肿胀度 造模前,各组大鼠足跖关节肿胀度比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；造模后及治疗后,模型组、阳性组、高剂量组、低剂量组足跖关节肿胀度体积大于空白组,差异具有统计学意义(P＜0.05)；治疗后,阳性组、高剂量组、低剂量组足跖关节肿胀度体积小于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 五组大鼠足跖关节肿胀度比较(±s,ml)

表1 五组大鼠足跖关节肿胀度比较(±s,ml)

注：与空白组比较,aP＜0.05；与模型组比较,bP＜0.05

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2.3 大鼠足肿胀度 致炎30 min后,阳性A组足肿胀度与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)。致炎60、120 min后,高剂量A组、低剂量A组、阳性A组足肿胀度与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 四组大鼠足肿胀度比较(±s,cm)

注：与对照组比较,aP＜0.05

对照组 10 0.55±0.28 1.16±0.30 1.23±0.32阳性A组 10 0.21±0.14a 0.37±0.26a 0.42±0.28a高剂量A组 10 0.67±7.54 0.54±0.26a 0.49±0.17a低剂量A组 10 0.88±5.32 0.87±0.23a 0.84±0.20a

3 讨论

豨莶草味苦,性寒,归肝、肾经,具有祛风湿、强筋骨、利关节之效［4,5］。现代药理学研究表明,豨莶草有抗感染和较好的镇痛作用,对细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫均有抑制作用,可通过调整机体免疫功能,改善局部病理反应而达到抗风湿作用；臭梧桐性味苦、辛,入肝经,具有祛风湿、通经络之效［6,7］。本研究按照古方豨桐丸原方组成比例,制成凝胶膏剂,探索豨桐凝胶膏剂的临床前主要药效。

本研究利用尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎模型,证明了豨桐凝胶膏剂可改善大鼠痛风性关节炎的足肿胀和关节功能；用豨桐凝胶膏剂涂抹大鼠右后足足跖皮肤,后用蛋清致炎,豨桐凝胶膏剂高低剂量组对比对照组大鼠足肿胀程度明显减轻。提示豨桐凝胶膏剂有一定的抗炎作用。

综上所述,豨桐凝胶膏剂可改善尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎,并且具有一定的抗炎作用,望本研究为临床应用豨桐凝胶膏剂治疗痛风性关节炎等痹症提供一定的依据。