华蟾素对人胃癌SGC7901细胞增殖及Rho GTPase表达的影响*

李楠静，黄 娟，张 又，何 菲

(1．成都中医药大学临床医学院，成都 610072；2.四川省人民医院血液科，成都 610072； 3．四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室，成都610041)

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在我国发病率和病死率较高。目前除了化疗等传统治疗手段以外，也在探索中西医结合的肿瘤综合治疗方案。华蟾素是从传统中药材蟾皮中提取的生物制剂，具有清热解毒、消肿化瘀等功效，多项研究发现其具有较强的抗肿瘤作用[1-2]。Rho GTPases是重要的细胞内信号分子，参与调控许多细胞生理进程，Rho家族在肿瘤细胞中通常呈高表达，几乎参与了肿瘤发生、发展的每一个重要环节，RhoA、Cdc42和Rac1是其中最受关注的分子[3-4]。本实验通过华蟾素对胃癌SGC7901细胞增殖能力和细胞内Rho GTPases(RhoA、Cdc42、Rac1)表达的影响，为胃癌的综合治疗提供新的理论依据和选择方向。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 胃癌细胞系SGC7901(四川大学信号转导及分子靶向治疗实验室提供)；华蟾素(每支5 mL，安徽华润金蟾药业股份有限公司)；鼠抗人RhoA、Cdc42、Rac1、β-actin单克隆抗体(美国BD公司)；RPMI1640培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)；lipofectamineTM2000、Trizol(美国Invitrogen公司)；RT-PCR试剂盒(日本Takara公司)；CCK-8试剂盒(日本Dojindo公司)。

1.2方法

1.2.1细胞培养 胃癌细胞系SGC7901由RPMI 1640 (含10%胎牛血清)， 37 ℃、5%CO2敷箱常规培养。

1.2.2CCK-8法检测细胞增殖抑制率 培养胃癌细胞系SGC7901细胞至对数生长期，按照每孔2×103密度接种于96孔板,培养24 h细胞贴壁后加入华蟾素，使其最终浓度达到0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL，每个实验组设3个复孔,并设对照组。分别于药物培养24、48、72 h进行检测。检测时更换为100 μL新鲜培养液与10 μL CCK-8试剂混合继续孵育4 h，用酶标仪读取吸光度(A)值,选择490 nm和630 nm双波长,增殖抑制率(%)=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。……