核因子κB受体活化因子配体对血管紧张素Ⅱ诱导人肾小球足细胞分泌血管内皮细胞生长因子的影响

齐悦 朱涛 覃志成

[摘要]目的 觀察核因子κB受体活化因子配体（RANKL）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的人肾足细胞分泌血管内皮细胞生长因子（VEGF）的影响，探究AngⅡ是否通过RANK/RANKL信号通路影响足细胞表达VEGF。方法 以分化为树枝状的人肾足细胞为研究对象，以不同浓度（0、1、10、100 nmol/L）的AngⅡ处理，分别于不同时间（0、6、12、24 h）通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基因VEGF、RANK和RANKL的mRNA表达变化。然后以不同剂量的RANKL与100 nmol/L AngⅡ共同刺激足细胞24 h后，通过RT-PCR检测VEGF的mRNA表达变化，流式细胞术检测足细胞凋亡率变化。结果 AngⅡ呈剂量和时间依赖性地诱导足细胞表达VEGF、RANK和RANKL（P<0.05），而过量RANKL表现出剂量依赖性地阻断VEGF表达增高 （P<0.05）；与对照组比较，AngⅡ可以显著诱导足细胞凋亡（P<0.05），而RANKL可以抑制由AngⅡ诱导的足细胞凋亡（P<0.05）。结论 AngⅡ可能通过RANK/RANKL信号通路影响足细胞表达VEGF，RANKL通过反馈调节下调VEGF基因表达来抑制AngⅡ引起的足细胞凋亡，保护肾脏。

[关键词]足细胞；血管紧张素Ⅱ；核因子κB受体活化因子配体；血管内皮细胞生长因子

[中图分类号] R692.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）5（b）-0013-05

Effect of receptor activator of nuclear factor-κB ligand on the secretion of vascular endothelial cell growth factor from human glomerular podocytes induced by angiotensinⅡ

QI Yue1 ZHU Tao2 QIN Zhi-cheng3

The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of receptor activator of nuclear factor-κB ligand （RANKL） on the secretion of vascular endothelial growth factor （VEGF） induced by angiotensin Ⅱ （AngⅡ） in human renal podocytes，and to explore whether AngⅡaffecting VEGF expression in podocytes through RANK/RANKL signaling pathway.Methods The human renal podocytes differentiated into dendrites were selected as research subjects.They were dealt with AngⅡin different concentrations （0，1，10，100 nmol/L）.Real-time fluorescence quantitative PCR was performed at different time （0，6，12，24 h） to detect the changes in mRNA expression of the genes VEGF，RANK，and RANKL.Then podocytes were stimulated with different doses of RANKL and 100 nmol/LM AngⅡ for 24 h.The expression of VEGF mRNA was detected by RT-PCR and the apoptosis rate of podocytes was detected by flow cytometry.Results AngⅡ induced podocyte expression of VEGF，RANK，and RANKL in a dose-and time-dependent manner （P<0.05），while excess RANKL showed dose-dependent blockade of VEGF expression increasing （P<0.05）.Compared with the control group，AngⅡ significantly induced podocyte apoptosis （P<0.05），while RANKL inhibited podocyte apoptosis induced by AngⅡ （P<0.05）.Conclusion AngⅡ may affect podocyte expression of VEGF through RANK/RANKL signaling pathway.RANKL inhibits the apoptosis of the podocytes induced by AngⅡ by regulating the expression of VEGF gene through feedback regulation and protects the kidneys.

[Key words]Podocyte；Angiotensin Ⅱ；Receptor activator of nuclear factor-κB ligand；Vascular endothelial growth factor

足细胞（肾小球脏层上皮细胞，podocyte）作为肾小球的滤过屏障的重要组成部分，在多种因素的刺激下可导致其损伤，从而引起蛋白尿的发生和肾小球的硬化[1]。血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，AngⅡ），作为肾脏局部肾系血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）的主要效应因子， 在间充质干细胞、小鼠和人足细胞等多种细胞中能诱导血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达上调，p-38、Akt、ERK可能发挥着重要作用[2-5]。但AngⅡ与VEGF在人足细胞中的作用机制仍有许多不明之处还需进一步研究。

Liu等[6]的研究发现一条和炎症相关的新信号通路介导足细胞损伤，即肿瘤坏死因子家族的核因子κB受体活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）信号，RNAK的配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）可以阻抑凋亡，保护足细胞。前期实验已发现AngⅡ可以通过p38MAPK信号通路诱导足细胞表达VEGF[7]，推测在人肾小球足细胞中是否也存在类似AngⅡ-RANK/RANKL-VEGF的通路，调节足细……