分光光度法测定叶绿素含量的提取液的适宜浓度

胡秉芬，黄华梨，季元祖，赵晓芳，戚建莉，张露荷，张广忠

(甘肃省林业科学研究院经济林研究所，甘肃 兰州 730020)

叶绿素含量是反映植物光合组织生理状况的一个基本指标，植物生理研究中经常涉及叶绿素含量的测定。叶绿素含量的测定方法主要有分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法等[1]。其中，应用最广泛的是分光光度法，即根据叶绿素对可见光的吸收光谱，在某一特定波长下，测定其吸光度(A)，然后利用公式计算叶绿素含量。吸光度是光线通过溶液后用来衡量光被溶质吸收程度的一个物理量。光的吸收程度与叶绿素提取液的浓度、液层的厚度以及入射及反射光的强度等因素有关。实际上，在进行比色分析时，因采用同样质料、相同规格的比色皿，反射光的强度相同，它们的影响可以相抵消。Beer定律是比色分析的理论基础，它适用于低浓度溶液，一般采用每升含溶质1 g的浓度(1 mg·mL-1)，液层厚度为1 cm。许大全[2]认为用于比色测定的叶绿素提取液的浓度过高，会导致叶绿素a/b比值的明显降低。舒展等[3]也认为叶绿素a/b比值的高低与用于比色的叶绿素提取液浓度有密切关系；当叶绿素提取液浓度在3.50～6.00 cm2·mL-1时，a/b比值变化不大，而在这个范围之外时，a/b比值随提取液浓度的降低而升高。笔者在以往试验中，使用分光光度法测定小麦(Triticumaestivum)叶片叶绿素含量时发现，取同一叶片对等部位厚度相同的两份等面积材料，用不同容积乙醇-丙酮混合液(1∶1)浸提叶片叶绿素，结果是材料相同、浓度不同的叶绿素提取液所测得的叶绿素含量不同。……