虎杖苷对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

万金兰

翼状胬肉为一种常见的眼科疾病，目前主要治疗以手术切除为主或术中联合应用抗增殖药治疗。有研究表明，角膜表面和结膜下翼状胬肉组织残留是手术后复发的主要原因［1］，手术可能为一种刺激因素，当病变组织中的成纤维细胞大量增殖伴发病理表现则在临床复发。虎杖苷（3，4’，5－三羟基二苯乙烯－3－β－单－D－葡萄糖苷）是从蓼科植物虎杖的干燥根茎中提取的有效成分，具有抗氧化、抗炎、免疫调节、改善糖脂代谢、脏器保护以及心血管疾病治疗作用［2］。该研究以人翼状胬肉成纤维细胞为材料，通过检测虎杖苷对人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts，HPF）增殖的影响，旨在为抗复发治疗翼状胬肉提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 虎杖苷（南京青泽医药科技开发有限公司，批号：20141106，纯度≥98%），RPMI1640 培养液、胎牛血清 （Gibco公司），四甲基偶氮唑蓝（MTT），二甲基亚砜（DMSO），PBS 液，胰蛋白酶，EDTA，青霉素，链霉素均来自Sigma公司；小鼠抗人角蛋白及波形蛋白单克隆抗体、小鼠抗人PCNA单克隆抗体和羊抗鼠IgG为武汉博士德公司产品。恒温二氧化碳培养箱，倒置显微镜，DG－3022A型酶联免疫检测仪，流式细胞仪（美国BD公司）。

1.2 方 法

1.2.1 PFB的体外培养、纯化及鉴定 选取自笔者所在医院行翼状胬肉手术中切除的胬肉组织，将组织块接种于直径为6 cm的培养皿中，加入含20%胎牛血清的高糖DMEM完全培养液，在37℃、体积5%CO2细胞培养箱中培养，换液1次/3～4 d。待瓶底长满70%～80%细胞后按1∶3传代。选取第3～4代细胞进行实验。制作细胞玻片，采用SP法染色鉴定细胞。

1.2.2 MTT检测虎杖苷对细胞增殖的影响 按1×104/ml将消化好的第3代成纤维细胞转移到96孔板内，共设4组，每组设复孔4孔，培养24 h，待细胞贴壁后加药。……