布鲁氏菌病三种检测方法的敏感性研究

胥敏 ，吕明 ，朱廷云 ，陈亮 ，王燚 ，张婷婷

（1.四川省中江县动物疫病预防控制中心，四川 中江 618100；2.四川省德阳市动物疫病预防控制中心，四川 德阳 618000）

主题词：布鲁氏菌病；检测方法；敏感性试验

1 材料

布氏菌抗体检测试纸条：青岛立见诊断技术发展中心，生产批号：030021803。

布鲁氏杆菌抗体快速检测卡：北京维德维康生物技术有限公司，生产批号：17120603。

布氏菌病虎红平板凝集试验抗原：青岛易邦生物工程有限公司，生产批号：170040601。

布氏菌病阳性、阴性血清：中国兽医药品监察所，生产批号：201702、201601。

布氏菌病虎红平板凝集试验阳性、阴性血清：青岛立见诊断技术发展中心，生产批号：20170503、20170502。

布氏菌病试管凝集试验阳性、阴性血清：青岛易邦生物工程有限公司，生产批号：20170202、20161002。

2 方法

2.1 布氏菌抗体检测试纸条法

2.1.1 操作方法 取10μL待检样品稀释液加入洁净稀释板内，在每个稀释孔中加入190μL生理盐水，混匀。取出检测试纸条，手持手柄端，将测试端（箭头端）浸入稀释好的待检样品中，同时设置阴性对照、空白对照，静置5～10min判定结果。

2.1.2 结果判定 检测线处（T）、质控线处（C）各出现一条紫红色条带，判为阳性。检测线（T）条带色泽的深浅，表明待检样品中布氏菌抗体效价的高低，颜色越深效价越高，颜色越浅效价越低。检测线处（T）未出现紫红色条带，仅质控线处（C）出现一条紫红色条带，说明检测样品中无布氏菌病抗体存在。质控线处（C）未出现条带，则判无效。

2.2 布鲁氏杆菌抗体快速检测卡法

2.2.1 操作方法 用试剂盒自带的滴管吸取1滴待检样品稀释液加入快速检测卡样品孔中，再分别吸取3滴加入样品孔中，同时设置阴性对照、空白对照，10min后观察显色区，15min内判定结果。

2.2.2 结果判定 C线显色，T线不明显判定为阴性；C线显色，T线明显判定为阳性；C线不显色，无论T线是否显色，该检测卡均判定为无效。

2.3 虎红平板凝集试验法

2.3.1 将一块洁净干燥的玻璃板划分成数个4 cm2的方格；每个方格中加入30μL待检血清，其旁边滴加抗原30μL；用牙签搅动血清和抗原，使之混合，同时设置阴性对照、空白对照。

2.3.2 结果判定 4min内观察结果，凡出现肉眼可见凝集现象者，判为阳性（+）；无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（-）。

3 结果

3.1 三种方法检测布氏菌病阳性血清的结果 见表1。

3.2 三种方法检测布氏菌病虎红平板凝集试验阳性血清的结果 见表2。

3.3 三种方法检测布氏菌病试管凝集试验阳性血清的结果 见表3。

4 分析

4.1 当布氏菌病阳性血清稀释至1∶1024时，布氏菌抗体检测试纸条呈阳性；当稀释至1∶256时，虎红平板凝集试验呈阳性；当稀释至1∶8192时，布鲁氏杆菌抗体快速检测卡呈阳性（表1）。

4.2 当布氏菌病虎红平板凝集试验阳性血清稀释至1∶1024时，布氏菌抗体检测试纸条呈阳性；当稀释至1∶128时，虎红平板凝集试验呈阳性；当稀释至1∶8192时，布鲁氏杆菌抗体快速检测卡呈阳性（表2）。

4.3 当布氏菌病试管凝集试验阳性血清稀释至1∶1024时，布氏菌抗体检测试纸条呈阳性；当稀释至1∶128时，虎红平板凝集试验呈阳性；当稀释至1∶8192时，布鲁氏杆菌抗体快速检测卡呈阳性（表3）。

5 结论

以上结果表明，布氏菌病3种检测方法均有较高的敏感性。其中，布鲁氏杆菌抗体快速检测卡法的敏感性＞布氏菌抗体检测试纸条法＞布氏菌病虎红平板凝集试验。按照规范要求，上述3种方法均不能用于布鲁氏杆菌病的确诊，而应使用试管凝集试验法。快速检测卡可检测牛、羊的全血、血清、血浆、原乳等样品；快速检测试纸条可用于猪、牛、羊的血清或血浆样品检测；布氏菌病虎红平板凝集试验法可用于猪、牛的血清或血浆样品检测。

表1 三种方法检测布氏菌病阳性血清的结果

表2 三种方法检测虎红平板试验阳性血清的结果

表3 三种方法检测试验凝集试验阳性血清的结果