原子吸收分光光度法测定牛黄解毒丸中雄黄的含量

贡庆欣

（吉林省通化市食品药品检验所化学室，吉林 通化 134000）

牛黄解毒丸为清热解毒类常用中药，被列入国家基本药物目录，现收载于《中华人民共和国药典》2015年版一部[1]。该方始见于元代 (1278年)《咽喉脉证通论》，由人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草8味药组成，临床上主要用于火热内盛、咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮、目赤肿痛[1]。牛黄解毒丸历经数百年发展，因其用途广泛、疗效确切，成为深受患者青睐的清热解毒名方，并发展出牛黄解毒片等新剂型，得到越来越多的应用[2]。

雄黄收载于2015年版《中国药典》一部，其主要成分是二硫化二砷 (AS2S2)，是国务院在《医疗用毒性药品管理办法》中规定的28种毒性中药之一[1，3]。雄黄入药始载于《神农本草经》 （称黄食石），在我国临床应用已有两千多年的历史，是中医内治外用的常用药之一，也是很多复方中药的重要组成，许多常用中药制剂都含有雄黄，如安宫牛黄丸、牛黄解毒丸、局方至宝散等[1，3-4]。由于雄黄含砷，临床屡有报道大量或长时间服用含雄黄或外用雄黄的制剂造成急、慢性中毒，因此雄黄及其复方的安全性问题受到了国内外医学界的质疑，影响了含雄黄中成药的国际声誉[3]。近年来含雄黄中成药多次被曝出重金属（主要是砷）超标等问题，其安全性受到越来越多的关注[5-9]。牛黄解毒丸作为最常用的含雄黄中成药，2015年版《中国药典》一部对其雄黄仅规定了显微鉴别和三氧化二砷检查，没有含量方面的规定，无法对雄黄质量进行有效控制[1]。为完善药品质量标准，保证临床用药安全有效，本实验采用原子吸收分光光度法对雄黄中的砷进行了定量分析，介绍如下。

1 试剂与试药

Agilent 200 SeriesAA型原子吸收分光光度计及工作站 (美国Agilent公司)；CEM MARS高通量密闭微波消解仪 (美国CEM公司)；砷空心阴极灯 (北京有色金属研究总院)，砷 (As)单元素标准溶液 (1000 μg/mL，编号GBW08611，批号17123，中国计量科学研究院)；AL104电子天平；盐酸和硝酸均为优级纯，水为超纯水；牛黄解毒丸15批，均为市售样品，来自12家药品生产企业。

2 方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 对照品贮备溶液的制备 精密量取砷单元素标准溶液适量，加水制成每 1 mL含砷100 μg的溶液，即得。

2.1.2 标准曲线溶液的制备 精密量取砷对照品贮备溶液适量，加10%混合酸 [硝酸-盐酸 (4∶1)]溶液制成每1 mL 含砷0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg的溶液，作为砷标准曲线溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品10丸，剪碎，混匀，精密称取0.2 g，置聚四氟乙烯微波消解罐中，加入硝酸4 mL、盐酸1 mL，在微波消解仪中消解，消解条件：功率1600 W，5 min内由室温升至120℃，在120℃保持5 min，在5 min内由120℃升温至160℃，在160℃保持5 min，然后5 min内由160℃升温至180℃，在180℃保持20 min，最后25 min内由180℃降温至30℃。消解液放冷，转移至50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加10%混合酸[硝酸-盐酸 (4∶1)]溶液稀释至刻度，摇匀，即得。同法制备试剂空白溶液。

2.1.4 测定法 精密吸取标准曲线溶液、供试品溶液和试剂空白溶液，照原子吸收分光光度法 (火焰原子化器，标准曲线法)[10]，在 193.7 nm波长处测定，计算，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 阴性干扰试验 按处方工艺制备不含雄黄的牛黄解毒丸阴性样品，取6份，按2.1实验方法测定砷的含量，结果6份样品均未检出砷。说明样品中除雄黄外的其他7味药材对砷的含量测定没有干扰，该方法专属性良好。

2.2.2 线性关系考察 精密量取砷对照品贮备溶液适量，加 10%混合酸 [硝酸-盐酸 (4∶1)]溶液制成每1 mL含砷0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg的溶液，照原子吸收分光光度法 (火焰原子化器，标准曲线法)[10]，在193.7 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标 (Y，mL)，以浓度为横坐标 (X，μg/mL)，得回归方程Y=5.295×10-3x+7.996×10-3，r=0.999 5。结果表明砷的浓度在0～20 μg/mL与吸光度之间线性关系良好。

2.2.3 重复性试验 称取同一批号牛黄解毒丸 (批号15090832)，剪碎，混匀，取约0.2 g，精密称定，共6份，按2.1项下方法测定砷的含量，结果平均含量为21.06 mg/g， RSD为1.26%，表明方法的重复性良好。

2.2.4 稳定性试验 称取同一批号牛黄解毒丸 (批号15090832)，剪碎，混匀，取约0.2 g，精密称定，共6份，分别放置0、2、4、8、12、24 h，按2.1项下方法测定砷的含量，结果RSD为1.35%，表明在24 h内的稳定性良好。

2.2.5 加样回收试验 精密称取已知砷含量的牛黄解毒丸 (批号15090832，As含量21.10 mg/g)6份，每份约0.1 g，精密加入砷单元素标准溶液 (1000 μg/mL)2 mL，混匀，按2.1实验方法测定回收率，结果见表1。结果表明，该方法的准确性良好。

表1 回收率测定结果 (n=6)

2.3 样品中砷的测定 精密称取15批不同批号的牛黄解毒丸样品，每批随机取3份，每份约0.2 g，按2.1方法测定砷的含量。结果见表2。

表2 牛黄解毒丸中砷含量测定结果 (n=3)

3 讨论

目前测定砷含量的方法主要有容量法[11-12]、原子吸收分光光度法 (AAS)[13-14]、电感耦合等离子体原子发射光谱法 (ICP-AES)[15]、电感耦合等离子体质谱法 (ICPMS)[16-17]等。与AAS法相比，容量法存在操作繁琐、灵敏度低、取样量大、有时消化不完全等缺点；ICP-AES法和ICP-MS由于灵敏度太高，当样品中砷含量较高时，容易导致仪器被污染。AAS法灵敏度高、专属性强，适合应用于中成药中雄黄的含量测定。

由于本品处方中雄黄含量较高，用石墨炉原子化器容易导致石墨炉被污染，用氢化物发生原子化器操作比较繁琐，选择火焰原子化器操作相对简便，能够满足实验要求。

实验中选择不同的消解试剂进行比较，即硝酸、硝酸-盐酸 (4∶1)、硝酸-盐酸 (3∶2)、硝酸-过氧化氢 (4∶1)，结果选择硝酸-盐酸 (4∶1)消解效果最好。同时还对微波消解的不同升温条件进行了比较，结果在正文中的升温条件下消解最完全。

采用本文方法对15批牛黄解毒丸中雄黄的砷含量进行了测定，15批供试品中砷含量为8.32～21.10 mg/g，按每丸重3 g计算，每丸砷含量在24.96～63.30 mg，不同厂家、批次的样品含量差异较大，最高与最低相差超过1倍。分析原因可能是（1）有的企业对所采购的雄黄药材未进行含量检测，或未按 《中国药典》规定对雄黄进行水飞炮制，可能采用不合格雄黄生产； (2)由于《药典》对牛黄解毒丸中的雄黄未规定含量测定，有的企业在生产过程中有意减少雄黄的投料量，未按照处方规定加入足量的雄黄。

由于牛黄解毒丸处方中只有雄黄中含砷，可以通过测定砷的含量控制制剂中雄黄的含量。

建议 《中国药典》 增加牛黄解毒丸中雄黄的含量测定，以有效控制生产投料，保证药品质量。