糖肾方对db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用

刘鹏 陈姣伊 刘言振�┱枣面� 张浩军 严美花 赵海玲 李平

摘要 目的：观察糖肾方（TangShenFang，TSF）对于自发性2型糖尿病肾病db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用。方法：8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组，分别为模型组（db/db）和观察组（db/db+TSF），每组9只；8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组（db/m），顺应性喂养2周后，给予糖肾方干预12周，处死小鼠，分离小鼠肾脏用于后续检测。利用PAS和Masson染色观察肾脏病理；利用WesternBlotting、Real-timePCR和免疫组化等技术检测肾脏组织纤维化TGF-β1/Smad3通路以及miRNA21和miRNA29b的表达。结果：糖肾方可以改善db/db小鼠尿微量白蛋白水平，减轻小鼠肾脏损伤；WesternBlotting、Real-timePCR和免疫组化结果显示，糖肾方可下调db/db小鼠肾脏中纤维化标志分子TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达；下调db/db小鼠肾脏miRNA21的表达，上调miRNA29b的表达。结论：糖肾方可作用于TGF-β1/Smad3信号通路抑制肾脏纤维化。

关键词 糖肾方；糖尿病肾病；肾脏纤维化；miRNA

AbstractObjective：ToobservetheeffectsofTangshenFormula（TSF）treatmentonrenalfibrosisandexploreitspotentialmechanismindb/dbmice.Methods：Eightweeksolddb/dbanddb/mmicewererandomlydividedintothreesubgroups，（db/m，db/db，db/db+TSF），andallmicewerefedwithanormaldiet.Aftertwoweeksadaptation，miceweremaintainedonTSFtreatmentfor12weeksandwerethensacrificedunderanesthesiaafterovernightfast.Animalurineandrenaltissuessampleswerecollectedforfurtheranalyses.ThekidneyswerewashedwithcoldPBSsolution；onepartoftherenaltissuewerestoredinliquidnitrogen，andanotherdeposited-80℃directlyforsubsequentfrozensections；therestofthekidneywerefixedintotheneutralformalinforpathologicalanalysis.TherenalfibrosiswasdetectedbyPASandMassonstaining.TherenalexpressionofTGF-β1/Smad3anditstargetgeneswereassessedbyWesternBlotting，real-timePCR，andIHC.Results：TSFdiminishedUACRofdb/dbmice.HistologicalanalysisusingPASandMassonstainingrevealedtheoccurrenceofmesangialmatrixexpansionandextracellularmatrixdepositioninthekidneysofdb/dbmice.ThetreatmentwithTSFsignificantlyamelioratedthesehistologicalrenalinjuriesindb/dbmice.WesternBlottingandreal-timePCRanalysisshowedthatexpressionlevelsofTGF-β1，Smad3，CollagenⅠandFibronectinweresignificantlydownregulatedinthedb/dbmicewithTSFtreatment.WithTSFtreatment，theexpressionlevelsofmiRNA21wasdownregulated，buttheexpressionlevelsofmiRNA29bwasupregulated.Conclusion：TSFattenuatedrenalfibrosisindb/dbmice，throughsuppressionofTGF-β1/Smad3pathway.

KeyWordsTangshenformula；Diabeticnephropathy；Renalfibrosis；miRNA

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.06.010

糖尿病肾病（DiabeticNephropathy，DN）是糖尿病（DiabetesMellitus，DM）主要的微血管并发症之一，已成为发达国家和我国发达地区终末期肾病（EndStageRvenalDisease，ESRD）的主要原因[1-2]。DN主要病理改变是由于细胞外基质的过度沉积，肾小球基底膜的厚度增加，进而导致系膜增殖和扩张，最终发展成为肾小球硬化和腎脏纤维化，丧失正常的功能。在DN的早期阶段（微量白蛋白尿阶段），胶原、纤连蛋白和层粘连蛋白在肾小球基底膜和系膜细胞外基质中的沉积明显增加，导致糖尿病弥漫性肾小球硬化症；在晚期阶段，肾脏中Ⅰ型和Ⅲ型胶原明显沉积[3]。由此可见，纤维化是DN肾脏病理的最主要特征。转化生长因子-β1（TGF-β1）是一种广谱细胞因子……