健康成年人血清α-L-岩藻糖苷酶参考区间的建立及适用性评价

刘纯岳，林帝金，方俊粤，梁洁满，劳伟思，林向华

(1.中山大学孙逸仙纪念医院检验科，广州 510120；2.广州医科大学附属第二医院检验科，广州 510220)

α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，参与含α-L-岩藻糖的糖脂、糖蛋白、糖苷等糖复合物的水解。众多研究证实AFU是诊断肝癌的标志酶，可作为原发性肝癌诊断、疗效和预后的重要监测指标[1]。近年来关于血清AFU水平变化和临床意义的研究也日益增多，但关于AFU参考区间的调查与建立的研究尚少。在临床实际工作中，参考区间(reference intervals，RI)是结果解释的有用工具，也是实验室报告的重要组成部分[2]。但临床检验项目往往会受多种因素的影响，如种族、性别、年龄、地域等[3]，从而导致参考区间的不同。因此，本研究参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)和国际临床化学联合会(IFCC)共同修订的指南《临床实验室如何确定和建立生物参考区间，批准指南-第三版，EP28-A3c》[4]的相关要求，建立健康成年人的血清AFU参考区间，为临床合理应用血清AFU提供依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)和国际临床化学联合会(IFCC)共同修订的指南《临床实验室如何确定和建立生物参考区间，批准指南-第三版，EP28-A3c》文件和中华人民共和国卫生行业标准WS/T402-2012文件[5]，按照分层整群随机抽样的原则，从中山大学孙逸仙纪念医院体检中心随机抽取2017年4～10月进行全面健康体检的成年人480例，男性和女性各240例，其中青年组(18～44岁)，中年组(45～59岁)和老年组(≥60岁)各160例，各个年龄组再按性别分组。①纳入标准：生化、免疫、血液实验室检查均在正常范围；内科体格检查正常；B超、X光、心电图检查正常；无吸烟嗜酒不良嗜好；近期无手术、药物治疗及住院治疗史；无家族遗传病史的男女个体，其中女性为非妊娠、哺乳、月经期；②排除标准[6]：孕妇，哺乳期及月经期女性；脑、肺、肾、胰等器官病变；原发性肝癌、转移性肝癌、先天性肝囊肿和其他良性肝占位病变、急慢性肝炎、肝硬化、腹腔积液；糖尿病、甲状腺机能亢进、白血病；非肝胆系统肿瘤(胃癌、结直肠癌、胰腺癌、卵巢癌等)。收集同期中山大学孙逸仙纪念医院消化内科、肝胆外科确诊为原发性肝癌的患者119例作为病例组，其中男性91例，女性28例，年龄24～82岁。

1.2 仪器与试剂 采用AU5800全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特有限公司)和中国四川迈克生物科技股份有限公司配套试剂、配套校准液、配套2水平质控品。

1.3 研究方法 采用CNPF底物法测定血清AFU，样本测定前先对仪器进行定标，采用Westgard多规则进行室内质控，2015年～2017年度累计变异系数(change value，CV)<5%。按照WS/T402-2012文件的要求，通过1/3规则进行判断，将疑似离群值的检测结果和其相邻值的差(D)和数据全距(R)相除，若D/R≥1/3考虑为离群值，应将其剔除，并需补足数据。实验数据中存在2个疑似离群点。其中最小的一个值(6.5 U/L)与其相邻点的D为1.8，R为49，D/R=0.04 <1/3，同理，最大的一个值(55.5 U/L)，算得D/R<1/3，故不认为该两个点为离群点，因而保留所有测定数据。

2 结果

2.2 各年龄组的AFU结果比较 青年组(24.18±5.78U/L)，中年组(26.80±6.79U/L)，老年组(26.47±6.47U/L)之间血清AFU结果的差异均无统计学意义(中年vs青年t=1.98，P=0.24；老年vs青年t=1.92，P=0.26；老年vs中年t=1.26，P=0.47；均P>0.05)。

2.3 各年龄组不同性别患者血清AFU结果比较 见表1。各年龄段男性和女性血清AFU结果的差异均无统计学意义(t=1.78～2.50，均P>0.05)。

组 别男 性女 性tP青年组中年组老年组24.84±5.5627.29±7.1827.03±6.6223.53±5.9626.27±6.3825.91±6.312.501.782.050.1510.3430.274

2.4 不同性别AFU结果比较 男性组(26.39±6.55 U/L)与女性组(25.23±6.31 U/L)血清AFU结果的差异无统计学意义(t=0.96，P=0.68)。

2.6 本研究建立参考区间的临床适用性评价 见表2。随机选取320例健康体检者(正常对照组)和119例原发性肝癌患者(原发性肝癌组)。已知本研究建立的AFU参考区间为13～38U/L，厂家参考区间为<40U/L，故以38U/L和40U/L为诊断临界点计算血清AFU诊断原发性肝癌的灵敏度和特异度。

注：.81，s=6.453，n=480。

表2 AFU以38 U/L和40 U/L为诊断临界点时诊断原发性肝癌的临床效能评价

注：原发性肝癌诊断的金标准为：肝脏占位病灶或者肝外转移灶活检或手术切除组织标本，经病理组织学和/或细胞学检查诊断为原发性肝癌[7]。

3 讨论

综上所述，通过研究建立了健康成年人血清AFU参考区间，使AFU在临床上能得到更合理、更科学的应用，可供临床医师和检验人员作为参考。将更有助于原发性肝癌的诊断，也为临床对原发性肝癌的诊断和治疗提供更加准确的实验依据。至于血清AFU能否用于原发性肝癌分期，还有待进一步研究。