MUC1基因表达和CXCL16在乳腺癌诊断中的应用

邓 君，洪 华，刘 蔚，孙昌瑞

(四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川 成都 610072)

乳腺癌是严重威胁女性生命的恶性肿瘤，发病率和死亡率呈上升趋势，临床上对乳腺癌的诊断，有X射线、超声、免疫组化等，但或灵敏度较低，或特异性较差，容易出现漏诊、误诊，而血清肿瘤标志物的检测简便快捷、创伤小等优势，广泛应用于临床，但是单一肿瘤标志物对临床诊断有较大局限，本研究探讨MUC1和CXCL16联合检测对乳腺癌诊断的临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料2016年1月至2017年12月我院明确病理诊断的157例乳腺癌患者，年龄24～76岁；102例良性乳腺瘤患者，其中纤维瘤59例和脂肪瘤43例，年龄21～73岁；126例其他肿瘤患者，其中肺癌31例，卵巢癌34例，肝癌28例和结肠癌33例，年龄21～73岁，对照组为体检中心健康女性50例，年龄20～77岁。受试者和患者手术前均空腹采血3 ml，MUC1检测需1 mg/ml EDTA抗凝，CXCL16不抗凝，均3000 r/min 离心 5 min。

1.2总RNA提取及RT-PCR淋巴细胞分离液分离单个核细胞，TRIZOL液提取总RNA，AMV反转录酶体系作RT-PCR，42 ℃反应55 min。

1.3SYBRGREENFQ-PCR

1.3.1引物和探针 采用PE公司Primer Express5.0软件在高保守区设计MUC1的引物和探针，由上海华舜生物公司合成。β-actin内对照试剂盒：由美国ABI生物公司生产。MUC1正义引物正向，5’-3’CGTCGTGGACATTGATGGTACC；MUC1反义引物，5’-3’GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA；β-actin正义引物：5’-3’CTCTTCCAGCCTTCCTTCCT；β-actin反义引物：5’-3’AGCACTGTGTTGGCGTACAG。

1.3.2SYBR GREEN FQ-PCR SYBR Premix Ex TaqTM(2x) 10 μl，PCR Forward Primer(10 μmol/L) 2 μl，PCR Reverse Primer(10 μmol/L) 2 μl，模板(cDNA 溶液)2 μl，去RNA酶水4 μl，反应条件：95 ℃ 10 ml cycle，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s 40 cycles，95 ℃ 15 s，60 ℃1 m，95 ℃30 s，60 ℃15 s 1 cycle。

1.3.3阳性率的计算[1]应用2-ΔΔCt方法计算目的基因相对表达量。将健康人组基因表达相对量设定为1，2-ΔΔCt值为乳腺癌组相对健康人组基因表达的倍数，以 2-ΔΔCt>2 判断为阳性。

1.4CXCL16的检测采用酶链免疫吸附法进行测定，试剂盒由美国R&D生物公司提供。

1.5统计学方法应用 SPSS 17.0 软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用方差分析及SNK-q检验；计数资料比较采用χ2检验。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1对照组与疾病组MUC1和CXCL16测定结果

对照组MUC1和CXCL16与良性乳腺病组差异无统计学意义(P> 0.05)，乳腺癌组MUC1和CXCL16均高于对照组和良性乳腺病组，MUC1高于其他肿瘤组(P< 0.05)，见表1。

表1 对照组与疾病组MUC1和CXCL16测定结果

#与对照组、良性乳腺疾病组和其他肿瘤组比较，P< 0.05；×与对照组、良性乳腺疾病组比较，P< 0.05

2.2MUC1和CXCL16在乳腺癌临床分期的检测结果乳腺癌组Ⅲ+Ⅳ期MUC1和CXCL16定量高于I+II期(P< 0.05)，见表2。

表2 MUC1和CXCL16在乳腺癌临床分期的检测结果

2.3MUC1和CXCL16在乳腺癌手术前后的检测结果MUC1和CXCL16在手术后显著下降(P< 0.05)，见表3。

表3 MUC1和CXCL16在乳腺癌手术前后的检测结果

2.4MUC1和CXCL16用于乳腺癌诊断的评价MUC1和CXCL16对乳腺癌诊断灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值见表4，MUC1检测特异性高，CXCL16检测灵敏度高，MUC1和CXCL16联合检测可提高对乳腺癌灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。

表4 MUC1和CXCL16对乳腺癌的诊断性能评价(%)

※与CXCL16比较，P< 0.05；#与MUC1比较，P< 0.05；*与CXCL16和MUC1比较，P< 0.05

3 讨论

MUC1 是一类高分子量糖蛋白，基因定位于染色体1q21，具有基因多态性，广泛表达于消化系统、呼吸系统和生殖系统等[2]，临床研究表明 MUC1 在 95%的乳腺癌中高表达，其异常表达与肿瘤细胞的生长、分化、浸润转移、粘附以及机体的免疫监控有关[3]，同时与肿瘤的恶性程度及预后不良密切相关。人们越来越多的将其用于乳腺癌相关基因的研究[4，5]，本研究也发现，MUC1在乳腺癌组的表达显著高于正常组，良性乳腺疾病组和其他肿瘤组，诊断特异性较高，与临床分期有关，手术后明显下降，说明MUC1作为一种潜在的乳腺癌血清学的一种重要标志物，是诊断乳腺癌和监测术后复发、观察疗效的较好指标之一。

CXCL16基因定位于染色体17p13上，是新近发现的趋化因子，与动脉粥样硬化、肝炎、风湿免疫、获得性免疫缺陷综合征等免疫及炎症相关[6，7]，近年来，有报道CXCL16 及受体 CXCR6 在恶性肿瘤中的高表达，可刺激肿瘤细胞体外增殖、侵袭、转移或复发[8，9]，但与乳腺癌关系的报道较少，还未见与其它乳腺癌的肿瘤标志物比较分析的相关报道，本研究对 CXCL16 与乳腺疾病的关系进行了分析，结果显示，CXCL16均高于正常对照组和良性乳腺疾病组，乳腺癌组和其他肿瘤组的CXCL16无显著性差异，CXCL16在手术后有显著下降，在乳腺癌组中，随着临床分期的升高，CXCL16递增，Ⅲ+Ⅳ期显著高于I+II期，提示 CXCL16 表达可能参与乳腺癌发生、发展过程，但CXCL16虽然灵敏度高，而特异性却较低。

本研究发现，在对乳腺癌诊断中，MUC1的特异性较高，CXCL16灵敏度较高，MUC1和CXCL16联合检测可提高对乳腺癌灵敏度、阳性预测值和阴性预测值，MUC1和CXCL16对乳腺癌术后随访有一定的意义，考虑到基层医院可能缺乏做基因检测的昂贵仪器，可以先检测CXCL16，再采用基因诊断和病理学方法进一步确诊，有助于提高对乳腺癌早期诊断。