高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯含量

2018-12-26 09:58王林林姜亚玲刘秋伟
长春工业大学学报 2018年6期
关键词:单硝酸山梨量瓶

王林林, 姜亚玲, 刘秋伟

(郑州工业应用技术学院 药学院, 河南 郑州 451100)

0 引 言

单硝酸异山梨酯属于硝酸酯类抗心绞痛药,为硝酸异山梨酯的活性代谢产物,是新一代长效抗心绞痛药物,药理作用与机制和硝酸甘油十分类似[1],主要通过扩张外周静脉、动脉和冠状动脉发挥作用。本品水溶性增大,不易透过血脑屏障,故与脂溶性大的硝酸异山梨酯比较中枢神经系统不良反应较轻,但本品起效较慢,不宜用于心绞痛急性发作,适用于冠心病的长期治疗和预防心绞痛发作[2-3]。单硝酸异山梨酯缓释片采用特别工艺,达到一天一次用药即可有效控制心绞痛疾病发作的效果,极大改善病人对药物的顺应性。缓释片使长期用药变得十分方便,对医生和患者都很有帮助。本研究是为了给仿制药单硝酸异山梨酯缓释片建立一种科学、合理的含量检测方法,要求证明采用的方法适合于相应的检测需求,准确度、重复性、精密度、专属性、线性和范围以及溶液稳定性都达到2010版药典的相关要求[4-5]。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

实验所用仪器和试剂分别见表1和表2。

表1 仪器

1.2 含量检查

1.2.1 溶液的制备

1.2.1.1 供试品溶液

取本品适量,研细,加流动相溶解并稀释制成每1 mL中约含单硝酸异山梨酯5 μg的溶液,作为供试品溶液;取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于单硝酸异山梨酯25 mg),置250 mL量瓶中,加流动相适量,振摇20 min,使单硝酸异山梨酯溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,作为供试品溶液[6-7]。

1.2.1.2 对照溶液

精密量取供试品适量,用流动相定量稀释制成每1 mL中约含单硝酸异山梨酯5 μg的溶液作为对照溶液。

1.2.2 测定法

试验操作:精密量取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪,记录色谱图。另取单硝酸异山梨酯对照品适量,同法测定[8-10]。按外标法以峰面积计算。

计算公式:

式中:A样/A对---- 供试品/对照品溶液中单硝酸异山梨酯的峰面积;

W样/W对----供试品/对照品溶液的称样量,g;

D样/D对----供试品/对照品溶液的稀释倍数;

W平----平均片重,g;

规格----60 mg。

1.2.3 含量结果

含量方法学(1)验证结果见表3。

表3 含量方法学(1)验证结果

1.3 含量方法学建立

1.3.1 色谱条件的选择

参照文献[16]单硝酸异山梨酯片的含量测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-水(25∶75)为流动相;检测波长为210 nm;柱温为35 ℃。

1.3.2 干扰试验

取本品辅料适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成相当于每1 mL中约含单硝酸异山梨酯0.1 mg的溶液,分别精密量取此溶液、水、流动相20 μL注入液相色谱仪,记录色谱图。

本品空白辅料、流动相、溶剂水在单硝酸异山梨酯峰附近无吸收峰,故本品辅料、流动相、溶剂水不干扰本品含量测定[11]。

1.3.3 线性试验与范围

取单硝酸异山梨酯原料0.025 5 g,置50 mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液,精密量取贮备液1、2、4、5、6、7.5 mL分别置25 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得[12],分别取上述溶液20 μL注入液相色谱仪,照含量测定方法在210 nm波长处测定,记录色谱图。以浓度(μg/mL)对峰面积进行线性回归,结果见表4和图1。

表4 单硝酸异山梨酯测定的线性范围考察结果

试验表明,单硝酸异山梨酯在20.40~153.00 μg/mL浓度范围内,线性关系良好。

图1 单硝酸异山梨酯线性关系

1.3.4 准确度试验

1.3.4.1 对照品溶液的制备

精密称定单硝酸异山梨酯对照品25 mg,置50 mL量瓶中,加水振摇使之溶解后,再用水稀释至刻度,摇匀,精密量取溶液5 mL置25 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液[13-14]。

1.3.4.2 样品溶液的制备

分别取单硝酸异山梨酯原料20、25、30 mg,精密称定,置250 mL量瓶中,再按处方加相应辅料,加水约200 mL,振摇20 min,使单硝酸异山梨酯溶解,用水稀释至刻度,使溶液中含主药为处方量的80%、100%、120%,过滤,摇匀,即得样品溶液(1)、 (2) 、(3),每个浓度平行制备3份样品溶液,按照含量测定方法在210 nm的波长处测定峰面积,计算样品的回收率及其RSD%,测定结果见表5。

表5 回收率测定结果

由试验结果可知,本方法测定单硝酸异山梨酯缓释片的含量,平均回收率为99.88%,RSD为0.54%,且回收率均在98.0%~102.0%范围内,本方法测定单硝酸异山梨酯准确度良好。

1.3.5 重复性试验

取本品细粉适量(约为单硝酸异山梨酯25 mg),精密称定6份样品,分别置250 mL容量瓶中,加水约200 mL,振摇使之溶解,再用水稀释至刻度,摇匀,过滤,为样品溶液。另取单硝酸异山梨酯对照品适量,加水振摇至单硝酸异山梨酯溶解,用水稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的溶液,摇匀,为对照品溶液[15-16]。分别精密量取6份对照品和样品溶液20 μL,依次注入液相色谱仪,记录色谱图。按照含量测定方法测定样品峰面积,计算其RSD%,见表6。

表6 重复性测定结果

由试验结果可知,此方法测定本品含量时重复性良好。

2 结 语

由上述试验可知,对本含量测定方法进行的线性、精密度、重复性、溶液稳定性、回收率等验证,试验结果均符合药品质量标准分析方法验证指导原则(文献[16]附录XIXA)的要求,表明此含量测定方法精密度好,准确度高,适用于本品的含量测定。

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