高效液相色谱法测定布洛芬涂膜剂中布洛芬的含量*

徐 军，冀 静

(1.天津市南开大学附属口腔医院，天津 300041; 2.天津市环湖医院，天津 300060)

布洛芬又名异丁苯丙酸，是临床上常用的非甾体抗炎药［1］，具有较强的抗炎，抗风湿及解热镇痛作用，其镇痛作用较强，比阿司匹林强16 ～32 倍，抗炎作用较弱，退热作用与阿司匹林相似，作用较之持久。布洛芬可以有效地抑制中枢性疼痛、急性疼痛、关节痛，另外，在组织损伤后给药能抑制疼痛发作并减轻疼痛的程度，而且可以抑制肿胀等炎症反应，防止痛觉过敏。当病人不能耐受阿司匹林、保泰松等药的副作用时，可以用布洛芬取而代之，但近期的研究表明，要重新认识布洛芬的副作用，长期服用有可能造成肾功能的衰竭，并且还会引起消化道出血等症。本剂型为外用涂膜剂［2］，可避免上述因口服而导致的不良反应。

1 仪器与试药

1.1 仪器 U -3310 型紫外-可见分光光度计(日本日立公司)，LC -10A 高效液相色谱仪(LC -10Atvp高压输液泵、SPD-10Avp 紫外检测器、Anastar 色谱工作站，日本岛津)。

1.2 试药 布洛芬原料(山东新华制药有限公司，批号11113697)，布洛芬涂膜剂(自制，批号120201、120202、120203)，布洛芬对照品(中国药品生物制品检定所，批号100719 -201105)，甲醇(色谱纯，天津市康科德色谱试剂公司)，磷酸、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil -C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(72∶28)，用磷酸调pH 至3.0，流速为1.0 ml/min，检测波长为220 nm，进样量为20 μl，柱温为室温［3］。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取布洛芬对照品100 mg，置于50 ml 量瓶中，加适量流动相使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为布洛芬对照品储备液。精密量取上述储备液5 ml，置于50 ml 量瓶中，加流动相至刻度，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的配制 精密量取布洛芬涂膜剂0.5 ml，置于50 ml 量瓶中，加适量流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液5 ml，置于50 ml 量瓶中，加流动相至刻度，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的配制 按处方配制不含布洛芬的空白样品，精密量取空白样品0.5 ml，置于50 ml量瓶中，加适量流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液5 ml，置于50 ml 量瓶中，加流动相至刻度，即得阴性对照溶液。

2.3 色谱条件的专属性 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图。见图1。布洛芬峰的理论塔板数在2000 以上，分离度良好。

2.4 线性关系考查 精密称取布洛芬对照品约100 mg，置于50 ml 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液2、2.25、2.5、2.75 和3.0 ml，分别置于25 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度(浓度分别0.16、0.18、0.20、0.22 和0.24 mg/ml)。分别精密量取20 μl 注入液相色谱仪，在220 nm 波长处测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标得回归方程为:Y= 45 917 285 X+184 692(r=0.9999)，布洛芬浓度在0.16 ～0.24 mg/ml 范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取标准曲线项下，浓度为0. 20 mg/ml的溶液，连续测定6 次，计算所得峰面积的RSD为0.31%，表明精密度良好。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC 色谱图

2.6 重复性试验 精密量取同一瓶布洛芬涂膜剂1 ml，共6 份，分别置50 ml 量瓶中，照样品含量测定方法制备供试品溶液。照“2.1”项下色谱条件测定含量，RSD 为0.40%，表明本方法重现性良好。

2.7 稳定性试验 取标准曲线项下，浓度为0. 20 mg/ml的溶液，在0、1、2、4、6、8、10 和24 h 测定峰面积，结果RSD 为1. 29%，表明溶液在24 h 内基本稳定。

2.8 回收率 精密称取布洛芬对照品0.2 g，置于100 ml 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，精密吸取2.5 ml 至25 ml 量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照“2.1”项下色谱条件进行测定。精密量取全辅料溶液(空白样品)适量，置50 ml 量瓶中，按处方比例加入相当于主药80%、100%和120%的布洛芬对照品，混合均匀，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 ml，置10 ml 量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，照“2.1”项下色谱条件进行测定，结果平均回收率为99.92%，RSD 为0.45%。结果见表1。

2.9 样品含量测定 取3 批样品，精密量取1 ml，分别置50 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 ml，置10 ml 量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密称取供试品溶液和对照品溶液各20 μl，照“2.1”项下色谱条件进行测定，以外标法计算含量。结果见表2。

表1 布洛芬的回收率测定结果

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择 在200 ～400 nm 进行扫描，在220 nm 和264 nm 处有最大吸收，264 nm 处的灵敏度低，故选择220 nm 为检测波长。

3.2 流动相的选择 流动相配比柱长一定时，选用甲醇-磷酸盐缓冲液比例分别为80∶ 20、72∶ 28 和76∶24 进行检测，随着甲醇比例的减少，主成分峰的保留时间延长，分离度降低，但也能达到分离度＞2 的要求。考虑到流动相为磷酸盐缓冲液和甲醇的混合溶液，如果甲醇的比例过高会使磷酸盐析出，损伤色谱柱，所以最终选择流动相配比为72∶ 28。

3.3 柱温 温度分别为30、25 和35 ℃，其他条件不变。结果显示，调整柱温时，对峰面积影响不大，升高温度，则保留时间缩短，但分离度不如正常比例的好，但也能达到分离度＞2 的要求;降低温度，则保留时间延长。

3.4 流速 流速分别为1、0.9 和1.1 ml/min，其他条件不变。结果显示，调整流速，对峰面积影响有一定的影响，流速增加，峰面积减小，则保留时间缩短，降低流速，峰面积增大，保留时间延长。保留时间短时，分离度不如正常条件下的好，保留时间长时，浪费时间和试验试剂，因此选用“2.1”项下的色谱条件。以上条件的改变，对峰面积没有显著的影响，且分离度满足要求，所以色谱条件的适用性良好。

1 公为亮.非甾体抗炎药物临床应用分析［J］.中国医药，2011，6(12):1476

2 金铃，王锦玉，仝燕，等.涂膜剂研究概述［J］. 中国实验方剂学杂志，2012，18(8):277

3 中国药典［S］.二部. 2010:附录194 -195