紫外-微波诱变选育抗菌肽高产菌株及抗菌肽性质分析

■朱永明 董伟洁 姜军坡王世英 朱宝成

（河北农业大学生命科学学院，河北保定071001）

微生物源抗菌肽是由微生物分泌的可杀灭或抑制其他细菌、真菌的小分子多肽，相对分子质量一般介于2 000～7 000 Da之间[1]。抗菌肽具有无残留、无毒害、无耐药性等优点，适合应用于畜牧养殖业[2-3]。

对微生物进行诱变选育是提高微生物胞外产物产量的一种有效方法。杜康等[4]对巴氏芽孢杆菌YBB进行微波诱变，筛选出两株产脲酶更高的突变菌株，诱变菌株尿素分解能力较原菌株提高1.5倍左右，矿化能力提高114%；郭宏文等[5]对产异淀粉酶的黄杆菌菌株D15进行紫外线诱变处理，获得了1株产异淀粉酶活力较高且产酶稳定的菌株ZYF32，比出发菌株提高了3.23倍；秦艳飞等[6]经紫外-微波复合诱变，获得1株PUM-13菌株，使那西肽摇瓶产量达883.450 μg/ml，比出发菌株的产量提高了17.14%。

Bacillus velezensisTu-569菌株是本研究组从幼兔肠道中分离出的一株对大肠杆菌有抑菌活性的芽孢杆菌[7]。向断奶仔兔日粮中添加Tu-569菌株制备的菌剂，可改善断奶仔兔的生产性能，降低幼兔腹泻率和死亡率[8]。本研究拟以抑制大肠杆菌能力为指标，对Tu-569菌株进行紫外-微波诱变选育，并以遗传稳定性试验评价正突变菌株的稳定性，以获得抑菌能力更强、遗传更稳定的高产菌株；通过观察高产菌株的菌落和菌体形态，以生理生化试验和API 50 CH细菌鉴定条综合评测高产菌株生理生化特性，结合16S rDNA序列分析来鉴定高产菌株的种属；通过考察硫酸铵盐析、透析处理、蛋白酶处理、加热处理、缓冲液pH值等对突变菌株胞外产抑菌活性物质的影响，探索抑菌物质的性质，为将其开发为抗菌肽制剂奠定基础。……