鸡肉中磺胺剂残留检验

□ 侯俊坚 佛山市食品药品检验检测中心

1 试药及器材

1.1 试药

氰甲烷、正己烷、丙酮、氯仿及甲醇等均采L.C.级。醋酸、无水硫酸钠、正丁醇荧光标示剂采试药特级。氧化铝采L.C.级、磺胺唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺一甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶标准品、磺胺奎林标准品试药级。

1.2 器具及材料

鸡肉（选自当地超市500 g）；搅拌均质机；离心机：转速能达3 000 rpm；振荡器：新光精机FS-6u；减压浓缩装置（Rotavapor RElll）；紫外灯：波长365 nm，（ModelCC-80）；高效液相层析仪：含紫外光检出器；硅胶薄层板：Silicagel60；微量注射器（705SNR）；荧光标示槽：长21 cm、高20 cm、宽0.8 cm，不锈钢制；净化管：内径1.5 cm，高30 cm的玻璃管柱；滤膜：孔径0.45 μm；水浴箱（SB-9D）。

1.3 展开溶媒

氯仿∶正丁醇（80∶20）。

1.4 荧光标示液的制备

取荧光标示剂25 mg溶于250 mL丙酮中。

1.5 标准溶液的制备

精确称取磺胺唑（STZ）、磺胺二甲嘧啶（SMT）、磺胺一甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）和磺胺喹啉（SQX）标准品各100 mg，用流动相溶液稀释至0.5～3.0 mg·L-1，作标准溶液。

1.6 饱和正己烷溶液的制备

取500 mL正己烷于分液漏斗中，加氰甲烷20 mL充分振摇，静置分层后取正己烷层（上层备用）。

2 检验方法

2.1 制备待检液

检体细切后用果汁机搅拌均匀，称取10 g置于搅拌均质器中，加入氰甲烷100 mL与无水硫酸钠50 g，搅拌5 min，移入离心瓶中，以3 000 rpm离心10 min，经滤纸过滤后取澄清液，用50 mL氰甲烷依上述步骤再萃取一次残渣，合并澄清液，加入饱和氰甲烷正己烷溶液30 mL，激烈振摇5 min后静置分层，去除正己烷层，用饱和氰甲烷-正己烷液30 mL依上述步骤再萃取2次，氰甲烷层移入浓缩瓶后以40 ℃水浴减压浓缩。

2.2 鉴别试验

沿硅胶薄层板下端2 cm横向处，每隔1 cm分别点上直径约为0.3 cm的检液线及标准溶液线（大约20 μL），风干后展开，展开溶媒浸没薄层板下端0.5～1 cm，展开高度约12 cm后取出风干，将其浸入盛有荧光标示液的荧光标示槽中，迅速取出风干，15～30 min内置于紫外灯下照射，观察检液上升的斑点位置及颜色，并与标准溶液的黄绿荧光斑点进行比较及鉴别[1]。

3 定量方法

依定性方法所制备的检液用85%的甲醇定容至4 mL，注入氧化铝净化管内，取85%甲醇10 mL清洗净化管，洗液丢弃，再以甲醇∶醋酸∶去离子水（30∶0.4∶70，v/v）混合溶液30 mL溶离磺胺剂，收集溶离液，于65 ℃水浴中减压浓缩至干，用1 mL液相层析流动相溶液溶解，经滤膜过滤后，作定量用检测液。

3.1 高效液相层析仪的条件

分离柱：C18（颗粒大小10 μm），内径3.9 mm，长30 cm。流动相溶液：以醋酸调整去离子水pH值为3.6，再与氰甲烷以80∶20(v/v)比例混匀，以滤膜过滤，滤液即为移动相溶液。流速：1.2 mL/min。检出器：紫外光检出器（波长267 nm）。

3.2 含量测定

待检液及标准溶液各取20 μL，分别注入液相层析仪，依据检液所得波峰的滞留时间，分别与标准溶液进行比较鉴别。由适量待检液所测得的峰面积，求出检体中磺胺剂的含量。高效液相层析法的最低检出量（MDL）为0.015 ppm。

4 总结

添加STZ、SMT、SMM、SDM及SQX 5种磺胺剂标准混合液于鸡肉样品中，添加量为0.1、0.2及0.3 μg/g，利用高效液相层析仪同时分析五种磺胺剂，结果显示五种磺胺剂的平均回收率分别为88.3%、91.1%、89.4%、86.1%和83.3%，由以上所见以氰甲烷抽出液回收率甚高。在鸡的前胸肉、肝脏、肾脏、心脏、胃及血清的空白检体图谱中结果显示，前胸肉、肾脏、心脏、胃及血清的检液净化效果颇佳。肝脏较差，在HPLC有SMT伪阳性的现象发生，以定性分析（TLC）确认则无此情形。