变异链球菌clpP基因启动子的克隆及活性测定

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变异链球菌(Streptococcusmutans，S.mutans)是草绿色链球菌的一种，革兰氏阳性球菌，兼性厌氧，是人类龋病的主要致病菌，可引起牙髓病、牙周病、颌骨炎，感染性心内膜炎等一系列并发症，严重影响患者的身心健康和生活质量[1-3]。变异链球菌在人类口腔中生存的酸碱度、温度、氧分压、渗透压等环境极易受到人类日常活动的影响，可在口腔中长期存活并不断繁殖，变异链球菌通过改变其蛋白质的表达状态(包括蛋白质的种类和表达的量)，以消除外界变化对菌体造成的影响[3]。然而，正是这种对环境改变的应对机制使得菌体内一些小分子蛋白质迅速聚集，多为瞬时表达和受应激因素刺激而发生损伤的蛋白质分子，这些蛋白质大多不但不能行驶应有的生物学功能，如不及时清除还会对细菌造成致命的损伤[4-6]。因此，及时清除迅速聚集的小分子蛋白质和维持细菌内环境的稳态(homeostasis)成为变异链球菌生存并成为龋损部位的优势菌以及致病的关键环节。我们前期研究证实变异链球菌ClpP蛋白酶在清除应激相关蛋白质和损伤的蛋白质、维持内环境稳态中发挥重要作用[4-5]。然而变异链球菌clpP基因在对外应激耐受中以何种方式被诱导及其表达调控机制的报道尚不多见，为此本文通过构建变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其突变体β-半乳糖苷酶 (β-glucuronidase,gusA)报道基因表达载体及其表达株，以研究变异链球菌clpP基因启动子生物活性及其结构，为阐明变异链球菌clpP基因表达调控的机制奠定理论和实验基础。……