一阶导数光谱法测定硫酸庆大霉素片溶出度及溶出行为的研究

姚永青，王立萍，刘英

(河南省食品药品检验所，郑州 450018)

庆大霉素为美国Schering公司M.J.weinstein等[1]于1963年发现，1966年其硫酸盐应用于临床，1965年我国中科院福建微生物研究所分离得到产生菌，1969年经研制成功后并投入生产[2]。硫酸庆大霉素是一种杀菌力较强的广谱抗生素，抗菌机理为与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，妨碍初始复合物的合成，从而导致细菌死亡[3]。

硫酸庆大霉素片现行质量标准为中国药典2015年版[4](Chp2015)，未对制剂溶出度进行控制。美国药典[5](USP 40)、英国药典2017[6](BP2017)、欧洲药典[7](EP9.0)与日本药典[8](JP17)均收载硫酸庆大霉素原料，均未收载该制剂。

硫酸庆大霉素片易溶于水，口服基本不吸收，属于生物药剂学分类系统(BCS)Ⅲ类(高溶解性-低渗透性药物)，在肠道中达到高浓度，临床用于治疗肠道感染及结肠手术前准备[9]，因此药物的溶出是保证药物有效性的关键因素。参考《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》[10]和Chp2015二部硫酸庆大霉素缓释片[4]溶出度检查法，建立硫酸庆大霉素片的溶出度方法及溶出液测定方法。并对不同企业与不同批号的硫酸庆大霉素片进行溶出曲线的考察，以评价其质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

XPE205电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)，Orion Star pH计(Thermo公司)，RCZ-8M溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)，数显式电热恒温水浴锅(上海跃进医疗器械有限公司)，Lambda35紫外可见分光光度计(美国PE公司)。

邻苯二甲醛(批号#F1613080，Sigma公司)，硫乙醇酸(批号#STBG1017V，Sigma公司)，甲醇(批号1833407619，Merck公司)，盐酸、硼酸、氢氧化钠、冰醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾、异丙醇均为分析纯，水为超纯水。

1.2 样品

硫酸庆大霉素原料(批号160710328，A企业)，辅料(玉米淀粉、糊精，批号170311、170302，G企业；预胶化淀粉、微晶纤维素、羟丙甲纤维素，批号170233、170442、160935，H企业；硬脂酸镁，批号20170406，I企业；聚丙烯酸树脂Ⅳ，批号EK20170426，J企业；聚乙二醇6000，批号103320150802，K企业；滑石粉，批号1701002，L企业；明胶，批号2028577，M企业；蔗糖，批号100120170310，N企业；川蜡，批号A160501，O企业)。

硫酸庆大霉素片(糖衣片：批号150723，A企业；批号20170202、20141005，B企业；批号150901，C企业；批号150402，D企业。薄膜衣片：批号1508281，E企业。素片：批号160601，F企业。规格均为40mg)。

2 试验方法与结果

2.1 溶出度检查法

2.1.1 溶出度试验条件[10-11]

浆法，50r/min，溶出介质为pH1.2盐酸溶液、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液与水共4种，溶出介质900mL，素片与薄膜衣片分别于15、30min取样，糖衣片于10、20、30、45、60、75min取样。

2.1.2 溶出度测定方法

取续滤液及对照溶液各3mL于具塞试管中，加异丙醇2.2mL，邻苯二醛(OPA)试液0.8mL，密塞，摇匀，置60℃水浴中加热15min，冷却至室温，照紫外-可见分光光度法，在300～400nm的波长范围内扫描一阶导数光谱图，在350～360nm的波长最大峰谷处分别测定吸光度。

2.2.3 溶出度计算方法

按供试品溶液的一阶导数吸光度与对照溶液的一阶导数吸光度的比值分别计算每片的溶出量。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白辅料溶液

精密称取按处方量比例混合后的辅料46.3mg，置200mL量瓶中，加pH1.2盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 硫酸庆大霉素原料储备液

精密称取硫酸庆大霉素原料19.9mg，置20mL量瓶中，加pH1.2盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液

取溶出液滤过，取续滤液即得。

2.2.4 对照溶液

取样品10片，研细，精密称取适量(约相当于平均片重)，按标示量用溶出介质溶解并稀释制成每1mL中约含40µg的溶液，滤过，取续滤液即得。

2.3 溶出度测定方法学验证

2.3.1 专属性

取空白辅料溶液3 m L于具塞试管中，按“2.1.2”项下的方法检测，结果空白辅料无干扰，表明该方法专属性良好。见图1。

2.3.2 线性与范围

分别精密量取硫酸庆大霉素原料储备液适量，加0.1mol/L的盐酸溶液分别稀释成含庆大霉素0.00995、0.01294、0.02587、0.03980、0.05174、0.07960、0.09950mg/mL的溶液。分别量取上述溶液各3mL于具塞试管中，按“2.1.2”项下的方法检测，结果硫酸庆大霉素在357nm波长处有最大一阶导数吸收，见图2。硫酸庆大霉素的一阶导数吸光度与取样量关系良好，线性范围为：0.02985mg～0.29850mg，线性方程为y = 45.665x +0.2923，r= 0.9994。见表1。

2.3.3 准确度(回收率)

精密称取硫酸庆大霉素原料约8.8mg、11.5mg、14.2mg各三份与混合均匀的处方量辅料约46mg，同置200mL量瓶中，加pH1.2盐酸溶液溶解并稀释至刻度，即得高中低3个浓度的回收率试验溶液。精密称取硫酸庆大霉素原料约13.5mg，置200mL容量瓶中，加pH1.2盐酸溶液溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。分别量取对照溶液及上述回收率试验溶液的续滤液各3mL于具塞试管中，按“2.1.2”项下的方法检测并计算回收率。结果硫酸庆大霉素平均回收率为98.8%，相对标准偏差(RSD)为1.9%。，表明该方法的准确度较好，能够保证溶出度测定的准确性，见表2。

图1 空白辅料一阶导数光谱图

图2 硫酸庆大霉素一阶导数光谱图

2.3.4 重复性

取硫酸庆大霉素片(批号20170202，B企业)20片，称其总重，研细，精密称取313.2mg(约相当于平均片重)，按标示量用pH1.2盐酸溶液溶解并稀释制成每1mL中约含40µg的溶液，滤过，取续滤液作为对照溶液。精密称取上述粉末6份(均约相当于平均片重)，同法制备供试品溶液。分别精密量取对照溶液和供试品溶液各3mL置具塞试管中，按“2.1.2”项下的方法检测，结果6份供试液含量分别为98.95%、97.51%、99.05%、98.37%、98.51%、96.64%，均值为98.2%，RSD%为0.9%，表明该方法的重复性良好，能够保证溶出度测定的重复性。

2.3.5 精密度

精密量取“2.3.4”项下第一份供试品溶液3mL共6份，置具塞试管中，按“2.1.2”项下的方法检测，结果分别为98.95%、98.62%、99.43%、99.71%、98.62%、98.70%，均值为99.0%，RSD%为0.5%，表明该方法的精密度良好。

表1 硫酸庆大霉素的线性与范围

表2 回收率试验结果

2.4 片剂的溶出行为

2017年国家药品计划抽验样品硫酸庆大霉素片156批次，包括素片(12批次，来自2家企业)、薄膜衣片(27批次，来自1家企业)与糖衣片(117批次，来自8家企业)三种剂型。国外药典均未收载硫酸庆大霉素片，亦未查询到原研信息，故本次试验选择素片与薄膜衣片各1批次，糖衣片4批次(来自4家企业)进行在pH1.2盐酸溶液、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液与水四种介质中溶出行为的研究。

2.4.1 素片的溶出行为

素片在pH1.2介质中，15min时的平均溶出度为99%，＞85%，批内溶出度RSD%为6.4%。在禁食状态下，胃内滞留(排空)半排空时间(T50%)为15～20min，对于高溶解性-低渗透性药物，以pH1.2盐酸溶液为介质，在适当的溶出度试验条件下，15min的溶出度＞85%时，可认为药物制剂的生物利用度不受溶出行为的限制，即制剂的行为与溶液相似[5]。因此可知素片的溶出行为良好，批内药物质量差异较小。

2.4.2 薄膜衣片的溶出行为

薄膜衣片在pH1.2介质中，15min时的平均溶出度为94%，均＞85%，批内溶出度RSD%为14.8%。表明薄膜衣片的溶出行为良好，但批内药物质量差异较大，提醒生产企业优化工艺，降低批内药物质量差异。

2.4.3 糖衣片的溶出行为

2.4.3.1 糖衣片在四种介质中的溶出行为

糖衣片(A企业)在pH1.2介质中溶出较快，20min时平均溶出度为80%，30min时为100%；在水中溶出最慢，20min时平均溶出度为13%，60min时为75%。批内溶出度的RSD值在pH1.2溶出介质中较小，在其余介质中均较大，在水中最大。

糖衣片(B企业)在四种介质中溶出均较慢；在pH1.2介质中批内溶出度的RSD值较小，在其余三种介质中均较大。60min时在pH1.2、pH4.0、pH6.8介质与水中的平均溶出度分别为83%、73%、68%与75%，批内溶出度的RSD分别为8.8%、11.2%、21.3%与17.6%。

糖衣片(C企业)在pH1.2介质中溶出较快，20min时平均溶出度为79%，30min时为88%；样品溶出度的RSD值较小；在其他三种介质中45min时平均溶出度均＞85%，批内溶出度的RSD值较大。

糖衣片(D企业)在pH1.2介质中溶出较快，20min时平均溶出度为54%，30min时为90%；在其他三种介质中溶出行为基本一致，30min时平均溶出度均约为50%，60min时均＞80%。在四种介质中批内溶出度的RSD值均较大，结果见图3与图4。

由图3与图4可知，A与C企业糖衣片在pH1.2介质中的溶出行为均较好，D企业糖衣片相对较差，A、C与D企业糖衣片在另外三种介质中的溶出行为均相对较差；B企业糖衣片在四种介质中溶出行为均较差，不能满足硫酸庆大霉素片需要快速溶出起效的要求，同时该企业样品的崩解时间在此次抽验的糖衣片中为最长，提示B企业考察片剂的处方与生产工艺，以确保药物的有效性。四家糖衣片企业样品的批内溶出度RSD值均较大，表明批内片剂质量差异均较大，提示各生产企业应规范生产工艺，保证产品质量。

2.4.3.2 不同企业糖衣片在四种介质中溶出行为的比较

在pH1.2介质中，A企业样品溶出较快，B企业样品溶出最慢。

在pH4.0介质中，C企业样品溶出较快，B企业样品溶出最慢。

在pH6.8介质中，A与C企业样品溶出较快，B企业样品溶出最慢。

在水中，C与D企业样品溶出较快，B企业样品溶出最慢，结果见图5。

由图5可知，B企业糖衣片在四种介质中溶出行为均较差；A、C与D企业糖衣片的溶出行为不同，但总体上均为在pH1.2介质中溶出较快，在水中溶出较慢。因药物经胃肠道进入体内，故在pH1.2介质中溶出较快利于药物的溶出释放，故A与C企业糖衣片进入体内能较快释放，溶出行为较好，D企业相对较差，B企业最差。

3 讨论

3.1 制剂的质量

硫酸庆大霉素为临床常用药，本次国家药品计划抽验共156批次，涉及27个省(直辖市、自治区)，其中经营企业占85.9%、医疗机构与生产企业各占7.1%，临床应用广泛。硫酸庆大霉素口服基本不吸收，在肠道能达到高浓度，主要用于治疗肠道疾病，要求片剂能快速释放起效，因此素片与薄膜衣片为较理想的剂型，能够快速释放达到治疗效果；A与C企业糖衣片进入体内能较快释放，溶出行为较好，D企业糖衣片相对较差，B企业糖衣片最差。因此提示B企业考察片剂的处方与生产工艺，保证药物质量。不同企业糖衣片在各介质中批内溶出度RSD均较大，提示糖衣片企业优化处方与生产工艺，保证药物质量。

图4 不同企业糖衣片在四种介质中的批内溶出度RSD

图5 不同企业糖衣片在四种介质中的溶出曲线

3.2 溶出度与崩解时限的相关性

从试验得知A、C与D企业糖衣片均在25min内完全崩解，但在水中30min的溶出度分别为39%、66%与55%；B企业糖衣片在36min内完全崩解，但在水中30min的溶出度仅为17%，45min时为51%。因此可知药物崩解与溶出有一定的相关性，但药物完全崩解并不意味药物溶出完全，现行标准仅对崩解时限进行控制，可以增加溶出度检查项，以更好的控制药物质量。

3.3 回收率试验溶液浓度的选择

文献[10]指出，对于高溶解性(BCS 1类和3类)和快速溶出的药物制剂，大多数情况下，标准中采用单点控制即可，取样时间点一般为30～60min，溶出限度通常应为≥70%～85%，因此硫酸庆大霉素片溶出限度可定为不得少于标示量的85%，溶出量测定方法准确度试验中回收率溶液的浓度可定为85%±20%。