土拉弗朗西斯氏菌LAMP快速检测方法的应用

李子微 邓仲良

（南华大学公共卫生学院，衡阳 417000）

土拉弗朗西斯氏菌（Francisella tularensis）是一种革兰氏阴性菌，可引起急性、感染性人畜共患疾病［1-2］。野兔和鼠类为主要传染源，蜱虫为主要传播媒介。土拉弗朗西斯氏菌有4个亚种［3］，其中A型土拉热亚种毒力最强［4］，在缺乏抗生素治疗的情况下，感染10个细菌可引发急性的、甚至致命的病症［5］，临床表现为发热、黄瘟等，严重者死亡。其传播途径多样，易扩散、毒性强、病死率高，被美国预防与疾控控制中心列为A类生物恐怖制剂［6］。40年前，在我国新疆、黑龙江和内蒙古曾有“野兔热”的报道［7］。

土拉弗朗西斯氏菌生长十分缓慢且可经气溶胶传播，采用细菌培养的方法检测诊断难度较大，同时，土拉弗朗西斯氏菌易与变形杆菌、鼠疫耶尔森氏菌菌产生血清学交叉反应。目前，土拉弗朗西斯氏菌病早期的核酸快速检测方法有普通PCR、Realtime PCR等，需借助大型仪器，且不适合现场实时检测和基层的推广。近年来寻求对土拉弗朗西斯氏菌进行快速、准确、操作简便的检测技术一直是相关研究的热点。2000年，Notomi等［8］发明了一种新型的核酸等温扩增技术-环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），利用具有链置换活性的BstDNA 聚合酶（Bst DNA polymerase）提供反应的动力，在65℃条件下反应15-60 min，能将目标片段可以扩增到1010倍左右，反应结果可通过反应副产物焦磷酸镁白色沉淀的混浊度来判定［9-11］。该方法规避了常规PCR反应的变性、退火、延伸等一系列复杂的过程，大大节省了反应时间和成本，且同时具有高特异性、高灵敏度、高效简便的特点，为临床和现场一线的快速检测提供可能。……