局部晚期鼻咽癌ERCC1 mRNA表达水平与铂类同期放化疗疗效的相关性研究

冯成军， 吴梦馨， 韦晓谋， 杨慧， 陈绍俊， 黄海欣

切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1， ERCC1)是核苷酸切除修复通路中的关键因子，通过修复铂类-DNA复合物的切除达到影响铂类药物的化疗效果[1]。目前许多研究表明ERCC1表达可以预测许多肿瘤中铂类化疗的疗效[2-3]。本研究测定ERCCl mRNA在放化疗前鼻咽癌组织标本中的表达水平并探索其表达水平与局部晚期鼻咽癌铂类同期放化疗疗效间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入2012年6月至2013年6月在广西医科大学第四附属医院肿瘤科住院，且鼻咽肿物经活检后病理诊断为鼻咽低分化鳞癌的初治患者共78例。男性60例，女性18例；年龄15～73岁，中位年龄46岁；根据2008年鼻咽癌分期标准，Ⅲ期47例，Ⅳ期31例。纳入标准：①预期生存期≥6个月；②ECOG体力评分为0～2分；③中性粒细胞计数≥1.5×109个/L；④血小板计数≥100×109个/L；血肌酐<1.2 mg/dl；⑤总胆红素和丙氨酸氨基转氨酶、天冬氨酸氨基转氨酶及碱性磷酸酶均≤正常值上限的2.5倍。所有患者均可评价近期疗效。患者及家属均签注知情同意书。本研究已经获得广西医科大学第四附属医院伦理委员会批准备案，伦理号KY2014179。

1.2 治疗方法

全部患者均给予单药顺铂同期化疗，化疗方案按顺铂80 mg/m2，放疗期间d1、d22和d43静脉给药；并给予6 MV直线加速器调强放疗，常规分割治疗，每周5次，放疗剂量：PGTVnx 70.06 Gy/31F，PGTVnd 70.06 Gy/31F，PTV1 66.03 Gy/31F，PTV2 54.25 Gy/31次。

1.3 ERCC1的检测

1.3.1 鼻咽癌肿瘤组织RNA的提取及检测 以Trizol RNA提取液提取100 mg鼻咽癌组织标本中的RNA，提取的RNA的纯度和完整性采用紫外-可见分光光度法及1%琼脂糖凝胶电泳进行测量，将RNA溶液放置于-80 ℃冰箱保存待用。

1.3.2 基因组cDNA的合成和PCR扩增 鼻咽癌组织标本提取出的cDNA逆转录采用TAKARA公司的逆转录试剂盒。第一步：去除基因组DNA。吸取总RNA 1.0 μg，加入5×gDNA Eraser Buffer 2.0 μl和gDNA Eraser 1.0 μl，加入无RNA酶水至10.0 μl，室温下放置30 min。第二步：逆转录。取去除基因组后的总RNA 10.0 μl，后加入 Prime Script RT Enzyme MIX 1.0 μl+RT Prime MIX 1.0 μl+5×Prime Script r Buffer 2 4.0 μl，最后加水至20.0 μl，置于37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 sec，然后4 ℃保存。第三步：PCR扩增。……