大白菜叶柄黑点症抗性苗期水培鉴定方法

雷娟利，钟新民，岳智臣，陶鹏，赵彦婷，李必元

(浙江省农业科学院 蔬菜研究所，浙江 杭州 310021)

大白菜叶柄黑点症严重影响大白菜的品质，降低商品价值，给生产者、经营者和消费者造成巨大损失，但引起大白菜叶柄黑点症发生的机制尚不完全清楚。有研究表明，大白菜叶柄黑点症是一种生理性病害，是基因型和环境因素共同作用的结果，过量施用氮肥是引起此症的重要因素[1]；不同形态氮素营养对大白菜叶柄黑点症的发生也有影响，其中铵态氮促进大白菜叶柄黑点症发生的作用高于硝态氮和酰胺态氮[2-3]；高晓蓉等[4]研究发现，叶柄黑点症的发生与品种有关，因此可从育种的角度解决叶柄黑点症的问题。

大白菜叶柄黑点症田间鉴定一般都在收获期进行，费时费工，且周期长，不能应用于抗叶柄黑点症育种工作。因此建立一套快速有效的大白菜叶柄黑点症苗期鉴定方法，对大白菜抗叶柄黑点症育种具有重要作用。本课题组前期研究发现[5]，1.0倍菜心营养液+10 mmol·L-1NH4NO3的配方可使抗感品系的叶柄黑点症充分展现，因此可用于大白菜叶柄黑点症苗期水培鉴定。本试验采用水培法，以1.0倍菜心营养液+10 mmol·L-1NH4NO3的配方，对部分材料进行叶柄黑点症抗性鉴定，现将鉴定方法及结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试材料由浙江省农业科学院蔬菜研究所大白菜甘蓝课题组提供，其中品系材料6份，分别是韩春娃C8-1、韩春娃-4-2-3-4、SD-1-12-3-1-6-3、PB-3-1-4-4-2-1、DG16-7和CXW-20-1-2-3-1；品种材料2份，分别是浙白3号和改良青杂3号。

1.2 大白菜叶柄黑点症苗期鉴定方法

1)每个品系(品种)取100粒籽粒饱满的种子，用蒸馏水洗净后放入带湿润滤纸的培养皿中，在25 ℃的培养箱中催芽48 h；2)各品系(品种)中分别挑选50粒发芽势一致的种子，用镊子放入圆筒水培海绵；将水培海绵放入50孔穴盘中，穴盘底部放置塑料托盘；托盘中加入0.2倍的菜心营养液，营养液的液面高度达到水培海绵高度1/2；3)幼苗真叶长出后，将托盘中菜心营养液浓度调整为0.5倍，继续培养；4)培养至幼苗呈4叶1心时，将托盘中菜心营养液浓度调整到1.0倍，继续培养5～7 d；5)挑选各品系(品种)长势整齐一致的幼苗，定植到盛有1.0倍菜心营养液+10 mmol·L-1NH4NO3的水培箱中，每个品系定植30株，定植株行距12 cm×12 cm；水培箱置于控温温室中，采用打氧通气；6)定植培养3周后每个品系(品种)随机取10株幼苗统计叶柄黑点数，黑点数越少的品系，叶柄黑点症的抗性越强。

菜心营养液的配方为每吨水加472 g四水硝酸钙[Ca(NO3)2·4H2O)]、202 g硝酸钾(KNO3)、246 g七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)、80 g磷酸二氢铵(NH4H2PO4)、100 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和174 g硫酸钾(K2SO4)。

2 结果与分析

2.1 不同品系(品种)大白菜叶柄黑点数

在1.0倍菜心营养液+10 mmol·L-1NH4NO3中定植培养3周后，每个品系(品种)随机取10株幼苗统计叶柄黑点数。

由表1可知，单株叶柄黑点数最多的是改良青杂3号和韩春娃-4-2-3-4，分别为19.8和18.8个；平均单株叶柄黑点数最少的是韩春娃C8-1、SD-1-12-3-1-6-3和PB-3-1-4-4-2-1，分别为0.6、1.0和1.2个。

表1 不同品系(品种)大白菜叶柄黑点数

2.2 不同品系(品种)大白菜叶柄黑点症抗性

在田间鉴定中，品系材料韩春娃C8-1和PB-3-1-4-4-2-1表现为高抗，品系材料韩春娃-4-2-3-4和品种材料改良青杂3号表现为高感[6]。结合本次试验结果，拟制定大白菜叶柄黑点症苗期水培鉴定抗感性分级标准如表2。按照此标准，有3个材料被归为高抗类，分别是韩春娃C8-1、SD-1-12-3-1-6-3和PB-3-1-4-4-2-1；有3个材料被归为抗病类，分别是DG16-7、CXW-20-1-2-3-1和浙白3号；有2个材料被归为高感类，分别是韩春娃-4-2-3-4和改良青杂3号。

表2 大白菜叶柄黑点症苗期水培鉴定 抗感性分级标准

3 小结与讨论

大白菜叶柄黑点症多发生在结球期、收获期和储藏期，因此田间鉴定费时费工，且周期长，不宜用于大量材料的筛选，因此很难应用于抗病育种实践中。

虽然也有报道用苗期扦插法鉴定大白菜叶柄黑点症[7]，但在实践中发现，此方法因为采用离体叶片，故易造成叶片黄化和污染，且离体叶片也不一定能完全反映植株的整体情况。总体来说，大白菜叶柄黑点症苗期水培鉴定方法的优势：1)相比在结球后期对大白菜采用逐个叶片小黑点数统计方法进行抗病性鉴定的田间鉴定法，该方法省时省工；2)相比用叶片扦插法进行抗病性鉴定，该技术避免叶片扦插法离体叶片容易黄化、污染等缺点，且活体鉴定方法能反映植株的真实情况。

前期研究中认为，1.0倍菜心营养液+5～10 mmol·L-1NH4NO3的配方可用于大白菜叶柄黑点症苗期水培鉴定[5]。因此本文专门介绍了采用1.0倍菜心营养液+10 mmol·L-1NH4NO3的配方进行大白菜叶柄黑点症抗性鉴定的具体方法，并用此法对部分材料进行鉴定研究，结果与田间鉴定结果基本一致，说明此方法可行。