miR-574-5p在胃癌中的表达水平及临床意义

(河北省石家庄市中医院脾胃科，河北石家庄 050051)

胃癌为全世界最常见的恶性肿瘤之一，严重危及患者生命[1,2]。由于胃癌发现时往往处于TNM分期III期和IV期，此时患者已出现淋巴结转移和远处转移，因此患者5年生存率不到40%，由于中国医疗条件限制，胃癌患者5年生存率较欧美等发达国家更低。因此对胃癌患者尽早诊治具有重要意义。随着表观遗传学在当前恶性肿瘤发病中日趋突出的作用，其在临床已引起广泛关注，故微小RNA(miRNAs)已被临床认为是研究恶性肿瘤发病机制的一大热点问题。miR-574-5p隶属miRNAs，近年来，有研究发现其在非小细胞肺癌[5]和大肠癌[6]等常见恶性肿瘤中存在过表达。但将其与胃癌的致病因素联系起来进行科研却并不多见，鉴于此，本研究通过对miR-574-5p的表达水平的分析，并将其与胃癌患者的病理及预后的相关性进行了探讨，现报告如下。

1 对象与方法

1.1对象 将我院2010年10月至于2017年10月期间接诊的64例胃癌患者作为本次研究主体。所有病患均被病理科确诊，且胃癌与癌旁组织均被切除。患者中男女性例数分别为35、29例，年龄范围在41～80岁，平均年龄(64.40±7.79)岁。全部病患均无吸烟与饮酒史，其中4例胃癌存在家族病史。本次研究所有研究主体均知情且签署同意书，并通过了院伦理委员会审批。

1.2标本的采集及处理 胃癌及癌旁组织标本切除离体后即刻投入液氮中，冷冻后储存于-80℃冰箱存备。

1.3实验方法

1.3.1RNA提取 采用miR逆转录试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)提取胃癌及癌旁组织总RNA。采用总RNA凝胶电泳显示两组标本总RNA 28S、18S、5S条带的清晰度和完整度，进行质量控制。

1.3.2RT-PCR 采用美国ABI公司生产的实时荧光定量PCR仪行RT-PCR，检测胃癌组织和癌旁组织中miR-574-5p的表达水平，以GAPDH为内参。miR-574-5p、GAPDH引物购自美国GeneCopoeia公司。miR-574-5p上游引物为：5'GCGTGAGTGTGTGTGTGTGAGTG3'，下游引物为：5'AAGCTCTGGGTTTCATGCCA3'；GAPDH上游引物为：5'CTCTGCTCCTCCTGTTCGAC'，下游引物为：5'-TTAAAAGCAGCCCTGGTGAC3'。PCR反应步骤如下：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s；40个循环，72 ℃延伸15 min。实验重复3次取平均值。

2 结果

2.1胃癌组织、癌旁组织中miR-574-5p的表达水平 RT-PCR检测结果：胃癌组织中miR-574-5p平均表达量为2.37±0.69，癌旁组织中miR-574-5p平均表达量为0.36±0.11，差异有统计学意义(t=15.504，P=0.000)。

2.2胃癌组织中miR-574-5p的表达与临床病理的关系 胃癌组织中miR-574-5p的表达水平与患者年龄、性别无关(P>0.05)。肿瘤大小>5 cm、TNM分期III-IV期、浸润深度T3-T4、低分化、出现远处转移的胃癌患者，miR-574-5p的表达水平高于肿瘤大小≤5cm、TNM分期I-II期、浸润深度T1-T2、中高分化、未出现远处转移的胃癌患者，差异均有统计学意义(P<0.01)。即胃癌组织中miR-574-5p的表达水平与肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、分化程度、远处转移有关(P<0.01)。见表1。

表1 胃癌组织中miR-574-5p的表达与临床病理的关系

2.3胃癌组织中miR-574-5p的表达与患者5年生存率的关系 Kaplan-meier分析显示，胃癌组织中miR-574-5p高表达的患者，5年生存率仅为15 %，远低于miR-574-5p低表达的患者的5年生存率(57 %)，差异有统计学意义(P=0.001)。见图1。

图1 胃癌组织中miR-574-5p的高表达和低表达与患者5年生存期的关系

3 讨论

miR-574-5p为miRNA-574的亚型之一，是miRNA家族中的一员，在多种生物学过程中扮演重要角色[8，9]。国外学者Furutani等[10]发现，miR-574-5p的表达与神经的发育及形成有关。miR-574-5p的高低表达影响着神经的发育，高表达对神经形成可其推动作用；反之，低表达则抑制神经形成，并导致细胞出现增殖状况。相关学者发现miR-574-5p的表达水平与肺癌[11]及肠癌[12]的抗药性及患者的预后关系密切。miR-574-5p的高表达在一定程度上与癌基因有类似的功能[10-12]。即对肺与肠的癌变及进展起着推动作用，但miR-574-5p表达水平与胃癌发病及病理改变的相关性临床可借鉴的研究资料太少，为了弥补临床当前对该项问题的研究空白，本次我们对此问题进行了研讨。

本研究采用RT-PCR方法检测了胃癌组织、癌旁组织中miR-574-5p的表达情况，实验数据显示，胃癌组织中miR-574-5p显示为高表达，明显高于癌旁正常的胃黏膜组织。这表明miR-574-5p的表达上调与胃癌的发病有关。根据相关文献[11-12]推测，miR-574-5p的表达参与胃癌发病的可能机制为：miR-574-5p通过负向调控Snai3的表达引起胃癌的癌变和癌细胞的迁移。此外我们亦检测了不同临床病理状况下胃癌患者组织中miR-574-5p的表达水平。结果发现，胃癌组织中miR-574-5p的表达水平与患者年龄、性别无明显关系(P>0.05)。一定程度上，胃癌组织中miR-574-5p的表达水平与肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、分化程度有关(P<0.01)。胃癌患者出现远处转移往往预示患者预后较差，而我们的实验结果显示，出现远处转移的胃癌患者组织中，miR-574-5p表达呈上调。表明miR-574-5p高表达的患者预后较差。

鉴于肿瘤患者预后和生存期关系密切，预后差的患者往往生存期较短，五年生存率较低[13]，因此我们做了Kaplan-meier分析，分析结果显示，胃癌组织中miR-574-5p高表达的患者，5年生存率明显低于miR-574-5p低表达的患者(P<0.01)。这表明miR-574-5p高表达的胃癌患者其预后更差，5年生存期更短。本研究与Foss等[14]的研究结果总体一致，但尚存在不同之处。Foss等的研究中，胃癌体积大小与miR-574-5p的表达并未表现出明显的相关性，推测与该项研究中其标本取自欧美人群有关，欧美人群与亚洲人种有较大差异；此外，Foss等的研究中样本量仅为24例，因此可能影响了实验的精确性。当然，我们的实验结果仍然有待后续研究的验证。

结合有关研究，我们推测，miR-574-5p可能通过下述途径参与了胃癌的发病及病情进展：miR-574-5p在胃癌组织中起与致癌基因相似的作用[13]；miR-574-5p通过负向调控Snai3的表达引起胃癌的癌变和癌细胞的迁移[14，15]。

胃癌组织中miR-574-5p呈高表达，胃癌组织中miR-574-5p的表达水平与肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、分化程度、远处转移有关，miR-574-5p高表达的患者其5年生存率较低。