强直性脊柱炎中HLA-B27表达及其与RF、外周血Th17细胞比率的关系

韩交玲

强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis，AS)是一种以脊柱僵硬并逐渐强直畸形为特征的慢性进行性自身免疫性疾病，以骶髂关节、脊柱关节、附着点炎症反应为主要特征。免疫调节异常是该病特征之一，因此，对造血系统产生不良影响，临床上可以用外周血细胞成分的变化检测和诊断某些结缔组织病[1-2]。辅助性T细胞17(T helper cell 17，Th17)是一种新发现的能够分泌白介素17(interleukin 17，IL-17)的T细胞亚群，在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义，Th17细胞不恰当的激活与多种自身免疫性疾病密切相关。但有关Th17细胞及相关效应因子在强直性脊柱炎患者体内表达及其与疾病活动关系的报道较少见[3-4]。本文对活动期和稳定期强直性脊柱炎患者的外周血Th17细胞进行检测，并与健康对照者进行比较，探讨强直性脊柱炎中人体白细胞抗原(HLA-B27)表达及其与类风湿因子(RF)、外周血Th17细胞比率的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2016年5月至2018年6月确诊为强直性脊柱炎的患者131例，其中活动期患者60例(活动组)，男43例，女17例，年龄20～65岁，平均年龄(36.6±5.9)岁；稳定期患者71例(稳定组)，男50例，女21例，年龄25～63岁，平均年龄(37.5±5.5)岁；另选择同期接收健康体检者80例(对照组)，男52例，女28例，年龄22～68岁，平均年龄(37.8±6.1)岁。三组一般资料差异无统计学意义，P＞0.05，具有可比性。均进行HLA-B27、RF、外周血Th17细胞检测。

1.2 纳入标准 下腰痛3个月以上；胸廓活动度明显低于同性别或同年龄的人；单侧骶髂关节炎3级以上；双侧骶髂关节炎2级以上。

1.3 排除标准 骶髂关节融合者；晚期强直性脊柱炎患者；恶性肿瘤患者；依从性差者；精神疾病者。

1.4 标本收集 采集所有人员静脉血5 mL，离心处理，3 200 r/min，离心8 min，取上层血清，将血液标本送至检验室，检测HLA-B27、RF、Th17水平。肝素钠抗凝，对外周血单个核细胞(PBMC)进行分离，用于流式细胞术检测。

1.5 仪器与试剂 HLA-B27：流式细胞仪(美国Becton Dickinson 公司)、HLA-B27检测试验盒(Becton Dickinson公司产品)。DNM-9602酶标分析仪，上海医疗仪器厂提供的S648型电热恒温水浴箱。采用ELISA方法检测，于450 nm波长处测定吸光度，A值＜0.4为阴性。A值≥0.4为阳性。RF：采用ELISA法检测，用0.05 M pH 9碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10 μg/mL。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1 mL，4 ℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，3 min/次。加样、加酶标抗体、加底物流显示、终止反应、判断结果，严格按照说明说执行。外周血Th17：流式细胞仪(美国Becton Dickinson 公司)、HLA-B27检测试验盒(Becton Dickinson 公司产品)。酶联免疫反应均采用双抗体夹心法，操作严格按照说明书执行。

1.6 统计学处理 采用SPSS 22.0软件进行分析，表达率用Kolmogorov-SmirnovTest正态分布检验，检验结果均为非正态数据，各组数据两两比较采用U检验，变量间相关性采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组人员流式细胞术HLA-B27表达结果(表1) 强直性脊柱炎患者HLA-B27表达率明显高于对照组患者，且活动期患者明显高于稳定期患者，差异有统计学意义，P＜0.05。

表1 三组人员流式细胞术HLA-B27表达率结果 单位：%

2.2 三组人员HLA-B27、RF、Th17阳性率比较(表2) 强直性脊柱炎患者的HLA-B27、RF、Th17细胞比率阳性率明显高于对照组，且活动组患者HLA-B27、RF、Th17细胞比率阳性率明显高于稳定组患者，差异有统计学意义，P＜0.05。

表2 三组人员HLA-B27、RF、Th17阳性率比较

2.3 HLA-B27表达与RF、Th17细胞比率的相关性分析(表3) HLA-B27表达与Th17细胞比率呈正相关，P＜0.01。

表3 HLA-B27表达与RF、Th17细胞比率的相关性分析

3 讨论

HLA-B27 是人类白细胞抗原Ⅰ类分子，HLA-B27有两条链，重链位于第6对染色体上HLA的基因编码，轻链是第15号染色体上非HLA基因编码。HLA-B27充当一种感染因子的受体部位，是免疫应答基因的标志物，决定对环境激发因素的易感性，在内质网中，HLA-B27重链有异常折叠倾向，可在细胞表面形成二聚体表达，参与疾病的发生和发展，可与外来抗原交叉反应，从而诱导产生对外来抗原的耐受性，增强中性白细胞活动性。HLA-B27作为强直性脊柱炎的重要实验室检测指标，对强直性脊柱炎的早期诊断具有重要意义，但是，淋巴细胞HLA-B27表达检测结果对于强直性脊柱炎患者的临床分期及病情进展程度的预测有无价值，是否可用于病情监测目前仍不得而知[5-6]。本研究结果提示，活动期患者，大多病情比较严重，且HLA-B27表达量与强直性脊柱炎疾病活动有关，可知HLA-B27水平与强直性脊柱炎活动性呈正相关(r＝0.719，P＜0.01)，因此，可以推断HLA-B27表达量可作为强直性脊柱炎病情活动度评估的实验室指标，客观地反映病情严重程度。

Th17是一种新发现的能够分泌IL-17的T细胞亚群，主要通过其分泌的细胞因子IL-17A、IL-17F、IL-6、IL-22等发挥作用，其中最主要的是IL-17A，即IL-17，在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义。Th17辅助细胞主要为对抗细胞外细菌及霉菌的免疫反应，最重要的执行细胞为嗜中性粒细胞(neutrophil)以及IgG/IgA/IgM的B细胞以及分泌IL-17的CD4T细胞等，其产生的IL-17能有效地介导中性粒细胞动员的兴奋过程，从而有效地介导了组织的炎症反应。研究证明[7-8]，一旦诱导产生了Th17细胞，并分泌IL-17，即可形成一个正反馈，通过诱生IL-6，导致Thl7细胞进一步产生。因此，Th17细胞主要是通过分泌促炎细胞因子IL-17，确保中性粒细胞分化、成熟和活化，刺激单核细胞和成纤维细胞活化来参与强直性脊柱炎的炎症反应。本研究结果提示，Th17细胞与强直性脊柱炎活动性呈正相关(r＝0.366，P＜0.01)，这提示Th17细胞主要介导强直性脊柱炎的炎症反应，并参与疾病的进展。

RF是变性的IgG刺激机体产生的一种自身抗体，是类风湿性关节炎诊断的指标，RF在类风湿性关节炎患者中的检出率很高[9-10]。本文研究的结果表明，强直性脊柱炎患者中RF的阳性率较低，说明了强直性脊柱炎患者很少伴有风湿热和类风湿性关节炎的存在，因此HLA-B27的检测有助于强直性脊柱炎与风湿热和类风湿性关节炎的鉴别诊断。综上所述，HLA-B27与Th17同时检测，更有助于强直性脊柱炎活动期的诊断。