防风多糖对过敏性鼻炎大鼠血清及鼻腔灌洗液细胞因子的影响

马志跃（通讯作者）李彬 冯勇 余晓旭 樊建刚 何刚

（四川省人民医学科学院·四川省人民医院耳鼻咽喉头颈外科 四川 成都 610072）

过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）属于鼻炎慢性病，发病过程复杂，难治愈，发病率呈现逐年上升趋势，严重者可影响学习、工作、睡眠、发声等[1]。防风多糖具有较好的抗过敏、降低外界刺激干扰的作用，对抗过敏抑制率达到55.51%，且没有肌肤刺激作用[2]。为进一步探讨防风多糖对AR的作用效果和机制，本研究建立大鼠AR模型，探讨防风多糖对AR模型大鼠的症状改善及其免疫作用机制。

1.材料与方法

1.1 实验动物与分组

健康SD大鼠32只，雌雄各半，体质量（200±10）g，购于成都达硕实验动物有限公司，使用许可证号：SYXK（川）2014-189。试验动物随机分为空白组（A）、模型组（B）、防风多糖低剂量组（C）、防风多糖高剂量组（D）。每组8只，清洁级实验室饲养。

1.2 过敏性鼻炎大鼠模型复制

参照常用卵清蛋白（OVA）复制AR模型方法[3]：将OVA 0.4mg、铝佐剂40mg及生理盐水1mL混匀，B、C、D组大鼠腹腔注射1mL，隔日1次注射致敏，连续7次，A组注射等体积生理盐水。第15～17天、第18～20天、第21～28天分别以0.25%、2%、5%的OVA溶液双侧滴鼻激发，每次100μL/鼻孔，A组大鼠以等体积生理盐水滴鼻激发，1次/d。

1.3 药物干预

每组动物于致敏第15d后开始灌胃给药，防风多糖高剂量组（600mg/kg）、低剂量组（300mg/kg），空白组与模型组给予等量0.9%生理盐水，1次/d，连续14d。

1.4 样本采集

末次给药1h后，戊巴比妥钠（60mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心取血清；剥离双侧鼻中隔黏膜，4%多聚甲醛固定；鼻腔灌洗液采集参考Kim[4]文献方法。

1.5 检测项目

将固定的鼻黏膜组织按常规方法制备石蜡切片，HE染色，镜检观察病理组织学变化；ELISA试剂盒（上海茁彩）检测血清IgE、IL-4、INF-γ及鼻腔灌洗液中IgE、IL-4、组胺（HA）含量。

1.6 统计学方法

数据采用SPSS20.0统计软件进行分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 病理组织观察

空白组鼻黏膜无炎症反应，模型组黏膜上皮坏死，鼻黏膜水肿、充血，炎症细胞浸润，防风多糖低剂量组鼻黏膜有少量炎症细胞浸润，防风多糖高剂量组可见轻度水肿，炎症细胞显著减少，图。

图1 大鼠鼻黏膜病理组织学变化

2.2 血清IgE、IL-4、INF-γ含量

造模成功后，血清IgE、IL-4含量较空白组显著升高，INF-γ含量显著降低（P＜0.01）。防风多糖低、高剂量组较模型组均可显著降低IgE、IL-4含量，升高INF-γ含量（P＜0.05），高剂量组较低剂量组IgE、IL-4含量降低显著，INF-γ含量升高显著（P＜0.01），表1。

表1 各组大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

2.2 鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量

造模成功后，模型组鼻腔灌洗液IgE、IL-4、HA含量较空白组显著升高（P＜0.01）。防风多糖低、高剂量组较模型组可显著降低IgE、IL-4、HA含量（P＜0.01），高剂量组较低剂量组降低更显著，表2。

表2 各组大鼠鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量

3.讨论

AR是变应原再次刺激使机体产生一系列生化反应，导致鼻黏膜水肿、喷嚏、鼻痒等症状[1]。本试验采用防风多糖治疗大鼠AR，病理组织考察结果表明，模型组黏膜上皮坏死、鼻黏膜水肿、充血，防风多糖高剂量组轻度水肿，炎症细胞显著减少，显著减轻AR病理组织损伤。

免疫球蛋白（IgE）是引起AR的主要抗体，变应原刺激后机体产生IgE抗体可联合细胞表面的IgE受体使机体致敏，再次接触相同变应原时会诱发炎性介质释放从而引起过敏反应[5]。本实验结果显示模型组较空白组血清IgE含量显著升高，防风多糖高、低剂量均可显著降低血清IgE含量（P＜0.01）。INF-γ、IL-4分别是Th1、Th2的重要细胞因子，在鼻炎发病中起核心作用，当Th1反应偏向Th2反应，IL-4分泌增加，INF-γ分泌减少[6]。本实验结果显示模型组较空白组血清IL-4含量显著増加，INF-γ显著降低（P＜0.01），防风多糖高剂量组较模型组显著降低IL-4含量，增加INF-γ含量（P＜0.01），说明防风多糖促进Th1/Th2细胞平衡。

鼻腔分泌物是由鼻腔中腺体分泌物、泪腺分泌物及血浆外渗液组成。而AR鼻腔局部细胞因子的变化具有特异性[7]。组胺（HA）是鼻过敏速发相的最重要的介质，可导致鼻黏膜水肿，鼻呼吸阻力増加，分泌物增多。本实验结果显示防风多糖高剂量组可显著降低HA含量（P＜0.01），说明防风多糖有抗HA效应。本试验鼻腔灌洗液IgE、IL-4含量变化与血清中结果趋势一致，说明防风多糖可有效地抑制AR大鼠外周血及鼻腔局部炎性介质，进而控制AR发展。

综上所述，防风多糖可通过有效抑制炎性介质，平衡细胞因子，缓解炎症来治疗过敏性鼻炎。