骨伤洗剂的制备工艺研究

巫繁菁 韦玮 唐林 姚金娥（通讯作者）

（广西骨伤医院药剂科 广西 南宁 530012）

骨伤洗剂源于广西骨伤医院的外用经验方骨洗方，临床上已使用多年，具有活血化瘀、消肿止痛的功效，主要用于治疗风湿骨痛、跌打损伤等骨科疾病。骨伤洗剂由桂枝、荆芥、山香、归尾、苏木、紫草、五味藤提取所得，合约0.55g生药材•mL-1，制剂中桂枝、荆芥、山香、归尾均含有挥发油成分[1-5]，现代药理研究表明桂枝、荆芥、归尾和山香挥发性成分均有抗炎镇痛的作用[5-10]。

由于骨洗剂含挥发性成分中药较多，传统用法为药材粉末加开水冲泡，不宜煎煮。故保留方中挥发性成分成为工艺研究的重点，水蒸气蒸馏法可以将药材中的挥发性成分随水蒸气蒸馏而带出，该法操作简便，设备简单，成本低，适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的成分的提取，是提取中药挥发油的重要方法[11]。本实验采用此法提取骨伤洗剂中的挥发油，按2015年版《中国药典》四部通则2204项下挥发油测定法（甲法）进行提取[12]，并以挥发油提取量为评价指标，通过正交试验优选骨伤洗剂的水提工艺，通过单因素试验考察浓缩工艺和成型工艺，为该制剂的规模化生产提供参考。

1.仪器与试药

BB89-2000挥发油提取器（上海化科实验器材有限公司）；JM-B5003电子分析天平（诸暨市超泽衡器设备有限公司）；JB-2恒温搅拌器（上海雷磁创益仪器仪表有限公司）；DZTW型调温电热套（北京市永光明医疗仪器有限公司）。

桂枝、荆芥、山香、归尾、苏木、紫草、五味藤均购自南宁市万药堂中药饮片有限公司，经广西骨伤医院药剂科姚金娥副主任药师鉴定，桂枝、荆芥、苏木、紫草、归尾符合《中国药典》2015版一部有关项下的规定，山香和五味藤符合《广西中药材标准》1990年版第二册有关项下的规定。聚山梨酯80（江西益普生药业有限公司），苯甲酸钠（成都金山化学试剂有限公司），其他试剂均为分析纯。

2.实验方法与结果

2.1 临床处方

桂枝，荆芥，山香，归尾，苏木，紫草，五味藤。一剂药材量为55g。

2.2 提取工艺的优选

2.2.1 正交试验优化工艺 取10倍处方量药材550g，加水浸泡后，连接挥发油提取器回流提取，收集挥发油及水提液。以挥发油量为指标进行工艺优化。根据预实验结果及文献报道[13]，影响挥发油提取的主要因素有浸泡时间、加水量、药材规格及提取时间，因此，各取三水平见表1，采用L9（34）正交试验设计表，正交试验安排及实验结果见表2，方差分析见表3。

表1 挥发油提取正交试验因素水平表

表2 挥发油正交实验结果表

表3 方差分析表

从表2可以看出，得油量最高的实验组合为A2B2C3D1,影响骨伤洗剂挥发油提取的因素：D＞A＞B＞C，C的影响作用最小，因此将C作为误差项进行方差分析。方差分析结果表明因素D对挥发油提取率具有显著影响（P＜0.05），提取时间、加水倍量、浸泡时间均无显著影响（P＞0.05）。挥发油提取预实验结果显示骨洗方中的挥发油在2h左右已提取完全，说明药材成分极易挥发，粉碎或短暂热处理以及放置过程均有可能造成挥发性耗损，故出现因素D影响最显著，饮片优于段和粗粉的结果。综上，从成本节约及提高产品质量考虑，选择较优工艺为A2B2C2D1，即药材饮片加水8倍量，浸泡2h，提取2h为较优提取工艺。

2.2.2 挥发油提取验证实验 取10倍处方量药材3份，每份550g，按优选出的提取工艺A2B2C2D1（饮片加8倍量水，浸泡2h，提取2h）进行3次验证试验，结果表明3次验证试验的挥发油量分别为0.99ml，0.92ml，0.96ml，RSD值为2.99%，说明工艺稳定，可行，重现性好。

2.3 浓缩体积考察

称取5倍处方量药材275g，加水8倍量，浸泡2h，加热回流2h，药液200目筛网滤过，滤液浓缩至2000ml，平均分成5份，每份400ml，再取其中4份分别浓缩成不同体积（50、100、200、300ml），分别放入带刻度的具塞塑料瓶中，密塞，常温下放置3天，观察沉淀情况；上清液200目筛网过滤，滤液再放置3天，观察沉淀情况，一个临床处方药材的提取液浓缩至100mL时比较稳定，沉淀较少，实验结果见表4。考虑到制剂设计、降低损耗及提高产品质量，故本品的浓缩体积优选为一个临床处方药材的提取液浓缩至100ml。

表4 沉淀情况观察（ml）

2.4 放置时间考察

称取2倍处方量药材3份，每份110克，加水8倍量，浸泡2h，加热回流2h，药液200目筛网滤过，滤液浓缩至200mL，分别放置6h、12h、24h，观察沉淀情况。上清液200目筛网过滤，滤液再放置24h，观察沉淀情况，结果表明，放置12h即可。实验结果见表5。

表5 放置时间考察

2.5 重复及放大试验

称取2倍处方量药材110g、5倍处方量药材275g和10倍处方量药材550g，分别加水8倍量，浸泡2h，加热回流2h，药液200目筛网滤过，浓缩至一定体积，进行放大及验证试验，实验安排及结果见表6。

表6 三次除杂考察数据

以不同的处方量进行的三次实验，结果基本一致。因此骨伤洗剂的提取工艺确定为中药饮片加水8倍量，浸泡2h，加热回流2h，收集挥发油蒸馏液，将余下药液用200目筛网滤过，滤液浓缩至相对密度1.004～1.007（25℃），放置12h，上清液200目筛网过滤，滤液加纯化水调整总量至指定体积，搅匀，即得。

2.6 骨伤洗剂的成型

2.6.1 乳化剂的种类及用量 聚山梨酯80为《中国药典》2015年版四部收载的用做增溶剂和乳化剂的药用辅料[14]，属于水溶性的非离子表面活性剂，具有不受电解质和溶液pH值影响，毒性和溶血性小，无刺激性，以及能与大多数药物配伍等优点，在药剂上应用较广，可供内服，也可供外用[15]。选择聚山梨酯80作为本品的乳化剂。取含挥发油的蒸馏液15mL（相当于骨洗方5倍临床处方量药材275g的提取量），搅拌下逐步加入聚山梨酯80，直至上部挥发油滴均匀分散为止，结果折算成制剂每L中加入聚山梨酯0.6g（即含量为0.06%）。

2.6.2 防腐剂的种类及用量 骨洗方提取液为含有挥发油的水溶液，苯甲酸钠为《中国药典》2015年版四部收载的用做抑菌剂的药用辅料[16]，易溶于水，在空气中稳定，选择苯甲酸钠作为防腐剂，并参照《中国药典》2015年版四部附录Ⅰ洗剂项下有关苯甲酸钠用量的要求，确定1000ml溶液中苯甲酸钠的用量为2g(即含量为0.2%）。

2.7 骨伤洗剂的工艺流程

2.7.1 制剂处方 处方药材5剂275g，聚山梨酯80 0.3g，苯甲酸钠1g。

2.7.2 制备工艺 称取5倍处方量药材275g，加水8倍量，浸泡2h，加热回流2h，收集挥发油蒸馏液，将余下药液用200目筛网滤过，滤液浓缩至约450ml，加入苯甲酸钠1g,加热至沸并保持微沸30min，放置12h，取上清液用200目筛网滤过，滤液加入挥发油蒸馏液15ml（加有聚山梨酯80 0.3g，搅拌使挥发油滴均匀分散），加纯水至500mL，搅匀，制成浓度为0.55g生药材•mL-1的溶液500mL。

3.讨论

工艺研究决定着中药制剂的物质基础，直接关系到药物的安全性、有效性和质量可控性。处方中药材主要含苷类、黄酮类、生物碱类，有机酸类等，这些成分用水提取即可。又因处方中的大部分中药含有挥发油，起到抗菌消炎镇痛的作用，经实验发现骨伤洗剂挥发油提取完全所需时间为2h左右，故将处方中所有组成中药用水蒸气蒸馏法共同提取，以保留挥发性成分，并在一定程度上节约了成本。该工艺合理可行，质量可控，可为骨伤洗剂的生产提供理论依据及相应的工艺参数。