基于噬菌体展示纳米抗体的绿色免疫PCR检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇

江东健，罗秀儿，何庆华,*

（1.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室，中德联合研究院，江西 南昌 330047；2.南昌大学食品学院，江西 南昌 330031）

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）是一种常见的真菌次级代谢产物，主要由禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）产生[1]，此外还有尖孢镰刀菌（F. oxysporum）、串珠镰刀菌（F. moniliforme）、拟枝孢镰刀菌（F. sporotricoides）、粉红镰刀菌（F. roseum）和雪腐镰刀菌（F. nivale）等亦可产生，DON广泛存在于大麦、小麦、玉米、燕麦等作物中，是一种全球性污染的真菌毒素[2-3]。

目前，检测DON的主要方法有薄层层析法[4]、高效液相色谱法[5]、气相色谱法、气相色谱-质谱法、胶体金免疫层析法[6]、酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法[7-9]等。其中ELISA法是目前较为常用的真菌毒素检测方法，该方法是在抗原抗体免疫学反应特异性结合的基础上，利用酶的高效催化作用以放大信号实现检测，具有操作简便、特异性强和灵敏度高等优点。然而，传统的真菌毒素免疫分析体系大多基于竞争型模式，制备真菌毒素全抗原（包被抗原或竞争抗原）是建立竞争型免疫分析方法的前提和关键。目前，传统的真菌毒素全抗原需以标准品为原料，通过化学合成的方式，与大分子蛋白偶联制备而成，存在制备成本高、批次误差大且对环境具有毒害作用等缺陷。

有鉴于此，寻求制备真菌毒素全抗原替代物用于免疫学分析的测定已成为当前研究的热点。近些年来，噬菌体展示技术在真菌毒素替代物上提供了一个新的思路。该技术是将外源编码蛋白的基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中，然后同衣壳蛋白进行融合表达，从而实现展示外源蛋白的目的[10]。……