胰岛素样生长因子-Ⅱ对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9表达的调节及其机制分析

杨杰

【摘 要】目的：分析胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）对卵巢癌细胞SKOV3中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法：持续培养细胞48h后加入不同浓度IGF-Ⅱ，继续培养18h，然后应用RT-PCR法行MMP-9mRNA测定，应用明胶酶谱法对MMP-9蛋白水平变化情况进行半定量测定。结果：IGF-Ⅱ能够对MMP-9蛋白分泌产生刺激作用，IGF-Ⅱ浓度不断增加的情况下其诱导作用也随之增强，随着浓度升高，MMP-9分泌量出现下降表现，但是IGF-Ⅱ对MMP-9基因表达水平不会产生明显影响。结论：IGF-Ⅱ能够对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9分泌产生刺激作用，在卵巢癌侵袭及转移等过程中也可发挥一定的作用。

【关键词】胰岛素样生长因子-Ⅱ;卵巢癌细胞SKOV3;MMP-9表达的调节及其机制

【中图分类号】R737.31【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2019）12-03--02

基质金属蛋白酶为Ca2+及Zn2+依赖酶家族，明胶酶表达与卵巢癌侵袭及转移存在重要关联。特异性金属蛋白酶抑制因子（TIMPs）可有效阻断明胶酶活性，肿瘤恶性表型可能与TIMPs、MMP-S及MMP-9等动态平衡失调可能存在重要關联[1]。此次研究旨在分析IGF-Ⅱ对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9表达的影响，如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料

于含10%小牛血清的RPMI1640培养基中对SKOV3肿瘤细胞株进行常规培养，TIMP-1、MMP-9及β-catin引物由上海生物工程公司合成，PCR试剂盒产自SABC公司，AMV反转录盒产自Peptotech公司，IGF-Ⅱ产自Peptotech公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

应用0.25%胰酶消化对数生长期卵巢癌细胞SKOV3中，在24孔板中接种1.5×105/ml浓度细胞悬液，1ml培养基/孔，每组均有4个复孔。在37℃环境下持续培育（48h），然后将上清弃除，应用无血清培养基进行清洗，然后将不含IGF-Ⅱ、含有10ng/ml、50ng/ml以及100ng/ml等不同浓度的IGF-Ⅱ加入其中，继续培养18h。收集细胞后将细胞总RNA提出出来并保存至-80℃冰箱内。……