12个茶树菇菌株鉴定及农艺性状分析*

张书良，张洪勇，刘 庆，韩建东

（1.德州市农业科学研究院，山东 德州 253015；2.山东省农业科学院农业资源与环境研究所，农业部废弃物基质化利用重点实验室，山东 济南 250100）

茶树菇 （Agrocybe aegerita） 隶属于真菌门（Eumycota） 担子菌亚门（Basidiomycotina） 伞菌目（Agaricales） 粪绣伞科 （BoIbitiaceae） 田头菇属（Agrocybe）[1]，原产于福建和江西，是一种珍稀食（药） 用菌。由于经济价值高，市场需求量大，种植区域由南方扩展到北方，目前在国内很多省份均有栽培。北方地区使用的茶树菇菌种基本上由外地引进而来，商品名、学名、俗名混杂多样，个体性状与描述有很大差异，同名异物和同物异名现象较为普遍。本研究从山东、福建、江西等茶树菇主产区引进收集12个茶树菇菌株，通过菌株间的拮抗试验和农艺性状的比较分析，明确茶树菇不同菌株间的亲缘关系及各菌株农艺性状特点，为茶树菇种质资源分类鉴定、遗传育种和推广利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株

试验供试菌株详情见表1。

表1 供试茶树菇菌株Tab.1 Tested strains of Agrocybe aegerita

1.1.2 供试培养基

PDA培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g，水1 000 mL，pH自然。

栽培料：棉籽壳50%、玉米芯20%、麦麸18%、玉米粉5%、豆粕4%、石膏1%、石灰2%，含水量63%。

1.2 试验方法

1.2.1 菌丝拮抗试验

参照文献[2]的方法进行。将各菌株分别接种于PDA平板培养基上；培养一定时间后，在无菌条件下，用直径5 mm的打孔器，在每个培养好的菌落上打取生长一致的带菌圆饼。随机取2个菌株的带菌圆饼，接种至同一PDA平板培养基中的2个区域，间隔4 cm，在23℃～25℃条件下培养10 d，观察菌丝生长情况。

1.2.2 农艺性状测定

称取棉籽壳和玉米芯，分别加水预湿16 h，再与其他原料混合搅拌均匀，调节含水量到63%左右。每袋装料高度为10 cm，直径6 cm，装料均匀，松紧度一致，高压蒸汽灭菌，冷却后在无菌环境下接种。每个菌株设3组，每组20袋，共60袋。将接种好的栽培袋放入培养室，温度20℃～22℃，空气相对湿度70%左右，避光培养至菌丝长满菌袋。菌丝长满菌袋后按常规方法进行出菇管理[3]。

菌丝长过菌包肩部1 cm～2 cm时，用记号笔在菌丝生长前端画线，以后每隔5 d测量一次生长距离，计算日平均生长速度。观察、记录发菌期菌丝的粗细、色泽和疏密程度等。

出菇过程中，观察不同菌株子实体的颜色，测量菌盖的直径和宽度、菌柄直径和长度等。

称量前两潮菇子实体的鲜重，计算茶树菇的生物学效率。

1.2.3 出菇温度测定

制作不同茶树菇菌株的出菇菌包，将菌包分别放置在12℃、14℃、16℃、18℃、20℃、26℃、28℃、30℃、32℃，共9个不同温度条件的出菇房内，各出菇房内每个菌株放置3组，每组20袋，观察记录是否正常出菇。

1.3 数据分析

采用Excel和DPS（version 7.05） 对试验数据进行处理和分析。

2 结果与分析

2.1 不同菌株的菌丝拮抗反应

对收集到的12个茶树菇菌株进行了拮抗反应试验，结果见表2，部分菌株间的拮抗反应情况见图1。

表2 不同菌株的菌丝拮抗反应Tab.2 Antagonistic reaction among different strains

由表2可以看出，3号、8号、11号菌株与其他菌株间均存在明显的拮抗反应，亲缘关系较远；2号、4号、12号菌株间无拮抗反应，亲缘关系较近，与其他菌株存在明显的拮抗反应；1号、5号、6号、7号、9号、10号菌株间也无拮抗反应，亲缘关系较近，与其他菌株间存在明显的拮抗反应。根据各菌株间有无拮抗反应的情况，可将12个茶树菇菌株分为5组，3号、8号、11号菌株各归为1组，2号、4号、12号菌株归为1组，1号、5号、6号、7号、9号、10号菌株归为1组。

图1 部分茶树菇菌株间的拮抗反应Fig.1 Antagonism reaction among some strains

2.2 不同菌株长势和菌丝生长速度

茶树菇不同菌株的菌丝长势和生长速度见表3。

表3 不同菌株菌丝的长势和生长速度Tab.3 Mycelial growth vigor and growth rate of different strains

试验结果显示，1号、4号、5号、6号、8号、9号和10号菌株长势较好，菌丝洁白、粗壮、浓密；2号、3号、7号、11号和12号菌株菌丝长势稍差，菌丝洁白、粗壮。6号、8号和9号菌株的菌丝生长速度最快，均为1.89 mm·d-1，其次是1号菌株，菌丝生长速度为1.85 mm·d-1，4个菌株之间差异不显著；11号菌丝生长速度最慢，为1.61 mm·d-1；其余菌株生长速度在 1.67 mm·d-1～1.79 mm·d-1。

表4 不同菌株的子实体形态特征Tab.4 Fruiting body morphology character of different strains

2.3 不同菌株的子实体形态特征

不同菌株的子实体形态特征见表4，部分菌株的子实体形态见图2。

从表4可以看出，供试12个茶树菇菌株均为丛生。菌盖颜色除3号是白色外，其余均为褐色或红色，但有深浅之别。各菌株菌盖直径在2.08 cm～2.97 cm，其中1号、6号和9号菌株的菌盖直径最大，3个菌株间差异不显著，但显著高于其他菌株；3号菌株菌盖直径最小，平均为2.08 cm，显著低于其他菌株。各菌株菌盖厚度在0.97 cm～1.33 cm，其中1号菌株菌盖厚度最大，平均为1.33 cm，与6号和9号菌株相比差异不显著，但显著高于其他菌株；2号和8号菌株的菌盖厚度最小，分别为0.98 cm和0.97 cm。各菌株菌柄长度在13.42 cm～19.19 cm，其中9号菌株的菌柄长度最长，为16.19 cm，与3号、4号、5号、6号和8号菌株相比差异不显著，与1号、2号、7号、10号、11号和12号菌株相比差异显著；2号、11号和12号菌株的菌柄长度较短，均为13.50 cm左右。各菌株的菌柄直径在0.66 cm～0.87 cm，其中3号、4号、6号和9号菌株的菌柄直径最长，为0.85 cm～0.87 cm，与1号、2号、7号和8号菌株相比差异不显著，与5号、10号、11号和12号菌株相比差异显著；10号、11号和12号菌株的菌柄直径最小，为0.67 cm～0.73 cm，均显著低于其他菌株。

图2 部分菌株的子实体形态Fig.2 Fruiting body morphology of some strains

2.4 不同菌株子实体的出菇温度

由于定向选育的结果，茶树菇的出菇温度可分为不同温型[4]，具体见表5。

由表5可以得出，1号菌株子实体适宜生长温度为20℃～30℃，较其他菌株偏高；5号和10号菌株子实体生长适宜温度较广，为14℃～30℃；2号、8号和12号菌株子实体生长适宜温度为18℃～28℃；3号、6号、9号和11号菌株子实体生长适宜温度为16℃～26℃；4号和7号菌株子实体生长适宜温度14℃～26℃，较其他菌株偏低。

2.5 不同菌株的产量和生物学效率

茶树菇一般采收三潮至四潮菇，前两潮菇的产量占到85%以上，对前两潮鲜菇的产量进行统计，结果见表6。

表5 不同菌株子实体的适宜生长温度Tab.5 Suitable growth temperature of different strains in fruiting body formation stage

表6 不同菌株的产量和生物学效率Tab.6 The yield and biological efficiency of different strains

从表6可以看出，1号、4号、6号、8号和9号菌株的鲜菇产量较高，达到277.24 g/包～284.4 g/包，生物学效率为86.64%～88.88%，与其他菌株相比达到显著差异；3号菌株产量最低，平均为205.94 g/包，生物学效率为64.35%，与其他菌株相比达到极显著差异；其余菌株鲜菇产量在230.45 g/包～258.08 g/包，生物学效率为72.02%～80.65%。

3 结论

真菌的拮抗反应是体细胞不亲和的直接体现，也是最常用的食用菌菌种鉴定方法[5]。如果2个菌株的菌落有拮抗现象，表明是不同菌株；如果没有拮抗现象，表明两者可能是同一菌种，也存在不是同一菌种的可能[6]。通过拮抗试验能够初步区分和识别市场上不同来源的茶树菇菌株。本研究中不同来源的12个茶树菇菌株，通过拮抗试验分为了5组，说明有些菌株亲缘关系较近，可能为同一菌种。

通过对12个茶树菇菌株农艺性状进行的测定和分析，结果表明不同菌株的农艺性状存在显著性差异，其中1号、4号、6号、8号和9号菌株的综合性状较好，菌丝生长速度快，子实体形态特征优良，生物学效率均在86%以上，优于其他菌株。3号菌株为白色品系，产量显著低于其他菌株，为茶树菇品种多样性改良提供了育种材料。根据茶树菇子实体生长的适宜温度，在不同时间选择适宜品种进行栽培，既有利于茶树菇的生长，又能减少资源的消耗，对利用自然条件栽培茶树菇具有重要意义。供试的12个菌株中，1号和8号茶树菇菌株综合性状优良，子实体生长适宜温度相对较高，可选择在夏秋季栽培；4号菌株子实体生长的适宜温度相对较低，综合性状优良，可作为春季栽培的菌株。