血清ANGPTL 2联合EGFR对乳腺癌患的诊断价值研究*

屈 睿，胡红心，朱红胜

(苏州市立医院检验科,江苏苏州 215000)

目前乳腺癌早期筛查和辅助诊断最具特异性的血清学生物标志物为糖链抗原153(CA153)，但仅30%-50%的乳腺癌患者CA153水平出现明显升高，而且结肠癌、肺癌、子宫颈癌和胰腺癌等疾病的患者也可出现CA153水平的升高，故CA153在乳腺癌的辅助诊断应用中具有一定的局限性[1]。乳腺癌临床治疗中亟待解决的问题为早期诊断困难和术后易复发转移[2]。因此，寻找预测乳腺癌发病的血清学标记物成为提高乳腺癌早期诊断率和寻找临床分子治疗靶点的研究热点。有大量研究表明表皮生长因子受体(EGFR)与乳腺癌的发生发展密切相关，是乳腺癌早期诊断、预后评估和分子治疗靶点[3-4]。血管生成素样蛋白-2(ANGPTL-2)是类似于血管生成素的糖蛋白，有研究表明其与癌症存在密切相关性，可作为癌症的预后或者预测性生物标志物以及极有可能作为癌症治疗的新靶点[5]。目前，国内外关于ANGPTL-2对乳腺癌患者的临床价值研究报道较少，故本研究拟通过检测乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平的变化，探讨这两项指标在乳腺癌诊断中的价值及相关性，以期为乳腺癌的辅助诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2017年10月至2018年10月本院经组织病理学确诊为初诊乳腺癌的患者120例纳入研究并作为乳腺癌组，年龄25～62岁，平均年龄(35.75±7.61)岁，其中浸润性导管癌87例，浸润性小叶癌8例，导管内原位癌25例。根据乳腺癌TNM分期(第7版)[6]进行临床分期，Ⅰ期患者12例，Ⅱ期患者55例，Ⅲ期患者53例。选取同时期本院收治的可手术切除治疗的乳腺良性病变患者120例作为良性组，年龄24～61岁，平均年龄(36.11±6.93)岁，其中导管内乳头状瘤37例，乳腺纤维腺瘤83例。另外，选取同期于本院进行健康体检的健康女性80例作为对照组，年龄23～63岁，平均年龄(34.81±7.52)岁。3组人群年龄、基础疾病等一般资料方面具有可比性(P>0.05)。所有纳入研究者知情且愿意参与本研究，签署知情同意书。本研究获得医院医学伦理委员会知情并审核批准。

1.2纳入与排除标准 乳腺癌组和良性组纳入标准：(1)所有患者均为初诊并经病理组织学确诊；(2)所有患者术前均未进行药物治疗、化疗或放疗等；(3)所有患者的临床病历资料完整。排除标准：(1)患有结肠癌、胃癌、胰腺癌等其他恶性肿瘤和其他肿瘤并发乳腺转移者；(2)心、肺、肝、肾功能、血脂、血糖异常者；(3)患有自身免疫性疾病者、甲状腺疾病和妊娠者；(4)病理资料和病历资料不完善者。

1.3方法 (1)收集患者的临床及病理资料，分析统计患者的临床和病理特征。(2)所有受试者均于治疗前或者体检当日清晨空腹采集静脉血5 mL，置于不含抗凝剂的红帽真空采血管中，3 000 r/min离心10 min后，取上清进行各指标检测。EGFR检测采用ELISA法，试剂盒购于美国R&D公司，操作严格按照试剂盒说明书进行。ANGPTL-2检测采用化学发光法，仪器使用德国罗氏Cobas e601全自动电化学发光分析仪及其配套试剂进行。

2 结 果

2.13组患者EGFR和ANGPTL-2水平的比较 3组患者血清EGFR和ANGPTL-2平均水平由高到低均依次为乳腺癌组、良性组、对照组，3组间血清ANGPTL-2水平比较差异有统计学意义(P<0.05)，良性组和乳腺癌组血清EGFR水平比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 3组患者EGFR和ANGPTL-2水平的比较

注：与对照组比较,*P<0.05；与良性组比较,△P<0.05

2.2乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平与临床病理特征的关系 肿瘤直径≥5 cm患者血清ANGPTL-2水平明显高于肿瘤直径<5 cm的患者(P<0.05)，而EGFR水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；血清EGFR和ANGPTL-2水平随着TNM分期的增加而呈升高趋势，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；肿瘤有转移患者的血清EGFR和ANGPTL-2水平显著高于肿瘤无转移患者(P<0.05)，见表2。

表2 乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平与临床病理特征的关系

注：与肿瘤直径<5 cm比较,*P<0.05；，与TNMⅠ期比较,△P<0.05；与TNM分期Ⅱ期比较,▲P<0.05；与肿瘤无转移组比较,#P<0.05

2.3血清EGFR和ANGPTL-2水平对乳腺癌的诊断价值分析 绘制ROC曲线分析得出血清EGFR、ANGPTL-2以及二者联合检测对乳腺癌诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.841、0.897、0.936，敏感度分别为：85.6%、80.2%、82.3%，特异度分别为62.5%、85.0%、90.2%，见图1。

图1 血清EGFR、ANGPTL-2以及二者联合检测对乳腺癌诊断的ROC曲线

2.4血清EGFR和ANGPTL-2水平在乳腺癌患者中的相关性分析 Pearson相关性分析显示，乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平呈正相关(r=0.52，P<0.001)，见图2。

图2 相关性分析

3 讨 论

乳腺癌是一种发生发展机制涉及多种因素的高度异质性恶性肿瘤，是世界范围内最常见的女性癌症，也是女性癌症死亡的最主要原因[7]。随着人口老龄化、环境的变化和诊断技术的改进，乳腺癌的发病率近年来呈升高趋势，发病人群也呈年轻化，但其发病早期症状和体征不典型，易误诊和漏诊[8]。故寻求新的检测指标用于乳腺癌的早期诊断和病情判断有着重要意义。

肿瘤细胞或者肿瘤微环境的细胞分泌因子表达的改变是癌症发生和进展的关键事件。有研究报道，ANGPTL蛋白家族成员在细胞癌变和转移发展等不同阶段通过自分泌或者旁分泌等形式进行活性调节[9]。ENDO等[10]发现转移性乳腺癌者血清ANGPTL-2水平显著高于健康人或导管原位癌或非转移性浸润性导管癌患者，雌激素受体和孕激素受体阴性患者血清ANGPTL-2水平可反映组织学分级，尤其是“三阴”患者。而且，ENDO等[11]还检测了携带MDA-MB231细胞的体内乳腺癌移植免疫缺陷雌性小鼠血清ANGPTL-2水平的变化，结果显示乳腺癌细胞分泌ANGPTL-2的水平随着细胞增殖和肿瘤进展而增加，验证了乳腺癌患者血清ANGPTL-2水平的变化趋势。MASUDA等[12]发现肿瘤细胞源性ANGPTL-2可能通过上调肿瘤细胞CXCR4的表达来增强乳腺癌细胞对CXCL12信号转导的应答，从而增加骨转移，提示这可能为治疗转移性乳腺癌提供了新的治疗方法。本课题组发现乳腺癌组患者血清ANGPTL-2水平明显高于良性组和对照组，肿瘤直径≥5 cm患者血清ANGPTL-2水平明显高于肿瘤直径<5 cm患者，血清ANGPTL-2水平随着TNM分期的增加而呈升高趋势，肿瘤有转移患者的血清ANGPTL-2水平显著高于肿瘤无转移患者。这与李峻[13]等的研究结果相符合，提示血清ANGPTL-2水平与乳腺癌的临床病理特征存在相关性，可作为判断乳腺癌肿瘤大小、临床分期和转移的潜在标志物，为乳腺癌的临床治疗效果评估和预后判断提供实验室依据。

EGFR为单链跨膜糖蛋白，可通过MAPK/EPK、PI3K-Akt和PLC-IP3/DAG等信号通路而产生Ras、PARP和Raf等细胞效应因子而参与调控乳腺癌的发生、发展、侵袭、转移和治疗[14]。张功学等[15]的研究发现乳腺癌癌组织中EGFR阳性表达和组织学分级、淋巴结转移有关，组织学分级越高、有淋巴结转移的乳腺癌患者,其EGFR阳性表达率越高。本研究结果显示乳腺癌组患者血清EGFR水平明显高于良性组和对照组，且其水平随着TNM分期的增加而呈升高趋势，肿瘤有转移患者的血清EGFR水平显著高于肿瘤无转移患者。这表明血清EGFR水平与乳腺癌的发生发展存在密切相关性。

目前尚未发现有关血清EGFR和ANGPTL-2在乳腺癌患者中的相关性以及二者联合对乳腺癌的诊断价值的文献报道。本研究探讨了血清EGFR和ANGPTL-2联合检测对乳腺癌的诊断价值，结果发现血清EGFR和ANGPTL-2对乳腺癌的诊断均具有较高的诊断价值，ANGPTL-2对乳腺癌的单独诊断效价高于EGFR，二者联合可明显提高诊断效能。本研究还首次报道了乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平呈正相关性，这表明二者间具有某种关联或者分子机制的联系。

本研究虽然检测了血清EGFR和ANGPTL-2在乳腺癌患者中的变化及其与临床病理特征的关系，并探讨了其单独及联合对乳腺癌的诊断价值，以及分析了二者间的关系，但仍存在不足之处，如存在样本量较少，未进行组织水平含量检测以及进行二者间相互关联的分子机制研究，这些将在后续的研究中逐一进行完善。

4 结 论

乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平升高，与临床病理特征存在密切联系，且二者间呈正相关性，对乳腺癌具有较高的诊断价值，联合检测可提高对乳腺癌的诊断效能。