细胞蜡块对恶性胸腹水的诊断价值

范红芸 韩烨 王贝 曾祥胜 李明

[摘要] 目的 通過对恶性胸腹水实施不同的诊断方法，观察其临床效果，探究不同诊断方法的临床应用特点。 方法  从来该院诊治的2018年7月—2019年2月的晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者中随机抽取79例，采用随机数字法随机分为对照组39例：实施常规细胞学检查，观察组40例：实施细胞蜡块检查，观察两组患者检出率和恶性胸腹水上皮肿瘤标志物表达情况。 结果 观察组经过细胞蜡块检查检出例数为30例，检出率为75.00%，对照组经过常规细胞学检查检出例数为20例，检出率为51.28%，观察组检出率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=14.442，P<0.05）;观察组患者经过细胞蜡块HE染色后背景较为干净，同时，肿瘤细胞异型性明显，呈腺管状和乳头状排列;转移性恶性胸腹水中的moc-31表现敏感，定位明确;在大部分腺癌中CEA具有较高的表达水平，染色背景较重。 结论 细胞蜡块与常规细胞学检查相比，恶性胸腹水患者检出率明显提高，肿瘤病灶来源可以被确定，临床确诊率升高，帮助临床医师做到对症治疗，减少患者痛苦，值得临床推广应用。

[关键词] 细胞蜡块;恶性胸腹水;细胞学检查

[中图分类号] R730          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）07（c）-0034-03

Diagnostic Value of Cell Wax Block for Malignant Hydrothorax and Ascites

FAN Hong-yun， HAN Ye， WANG Bei， ZENG Xiang-sheng， LI Ming

Department of Pathology， Xuyi People's Hospital， Xuyi， Jiangsu Province， 211700 China

[Abstract] Objective To observe the clinical effects of different diagnostic methods for malignant hydrothorax and ascites， and to explore the clinical application characteristics of different diagnostic methods. Methods 79 patients with advanced tumors with malignant hydrothorax and ascites from July 2018 to February 2019 were randomly selected from our hospital. They were randomly divided into control group by 39 patients： routine cytology， observation group 40 cases： the cell wax block examination was performed to observe the detection rate of the two groups of patients and the expression of tumor markers in malignant chest and abdomen. Results The number of cases detected by the cell wax block in the observation group was 30， the detection rate was 75.00%， and the number of cases detected by routine cytology in the control group was 20， the detection rate was 51.28%. The detection rate of the observation group higher than the control group，the difference was statistically significant（χ2=14.442， P<0.05）. The background of the observation group was clean after HE staining with cell wax block. At the same time， the tumor cells were abnormally shaped， and they were glandular and papillary; metastatic malignant ascites moc-31 is sensitive and well-defined; in most adenocarcinomas， CEA has a higher expression level and a heavier staining background. Conclusion Compared with conventional cytology， the detection rate of malignant hydrothorax and ascites patients is significantly improved. The source of tumor lesions can be determined and the clinical diagnosis rate is increased. It helps clinicians to achieve symptomatic treatment and reduces patient suffering. It is worthy of clinical promotion and application.

[Key words] Cell wax block; Malignant chest and ascites; Cytology

恶性胸腹水是由于癌性病变或者恶性肿瘤而引起胸腔壁层和腹腔出现弥漫性病变，患者体腔液体发生异常是该病的典型病理改变，降低患者生活质量，甚至会威胁患者生命[1]。恶性胸腹水是癌症患者晚期的主要并发症，提示病灶具有发生远处转移倾向[2-3]。分子诊断技术、免疫组织化学抗体、细胞蜡块技术呈发展趋势，为浆膜腔积液脱落细胞学样本提供有效信息。细胞蜡块可以明确浆膜腔积液的性质、以及为靶向治疗提供可靠的诊断依据。有研究显示，细胞蜡块应用于胸腔积液中，但是在恶性胸腹水方面的研究较少[4-5]。因此，从来该院诊治的2018年7月—2019年2月的晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者中随机抽取79例，采用随机数字法随机分为对照组39例：实施常规细胞学检查，观察组40例：实施细胞蜡块检查，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

从来该院诊治的晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者实施随机抽取79例，37例女性，42例男性，年龄范围在42～91岁，平均年龄为（56.34±3.25）岁，其中有20胃癌，10例卵巢癌，36例肺癌，8例卵巢癌，5例直肠癌。通过随机数字法将79例患者随机分为两组，即对照组39例，其中女性18例，男性21例，平均年龄为（55.76±4.16）岁;观察组40例，其中女性19例，男性21例，平均年龄为（55.35±3.97）岁。该研究通过该院伦理委员会的批准，并经过研究对象知情同意，自愿签署知情同意书，两组患者的基本资料统计学分析结果显示差异无统计学意义（P>0.05），可以进行比较。

纳入标准：被诊断为恶性肿瘤;伴随胸腹水症状[6];通过病理学检查，被确诊。排除标准：伴随严重的认知障碍或者严重结果精神类疾病患者;依从性较差患者;合并两种或者以上肿瘤疾病患者。

1.2  方法

对照组患者通过常规细胞学检查，首先针对胸腹水采用离心涂片方法进行处理（TD24-WS 低速台式离心机 ，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），随后实施细胞学检查。

观察组实施细胞蜡块检查：试剂盒采用S-P试剂盒、CK、P53、CEA、Cal、DAB显示剂（福州迈新生物试剂有限公司）。首先将每位患者的胸腹水制作为标本，将放置冰箱的温度设置为4℃，保持20 min;标本内物质发生自然沉淀，收集标本沉淀物，并进行10 min离心，取上清，将沉淀物收集起来，将剂量定为50～100 mL，放如离心管中进行5 min离心，取上清;在上清液中加入固定液AF液（800 mL水+3 700 mL95%乙醇混合液+500 mL甲醛原液+2包PBS缓冲盐），摇匀并静置10分钟;离心5～10 min（3 000 r/min），去除AF液;把标本沉渣做成细胞块，放在10%中性甲醛固定液，放置时间为4～6 h，完成后进行脱水、石蜡包埋、切片。胸腹水蜡块制作完成后，对切片脱蜡，经过两次PBS缓冲液冲洗，每次持续3 min，紧接着利用3%氯化氢封存八分钟后再用PBS缓冲液冲洗;随后采用柠檬酸冲液进行高压修复，时间为90 s;通过自然冷却，经过两次冲洗，每次冲洗保证3 min;添加一抗，在37℃孵育箱内孵育1 h;完成后，经过两次缓冲液连续冲洗，冲洗时间为5 min/次，随后添加二抗，在37℃孵育箱内孵育30 min，经过缓冲液冲洗后，添加DAB显色液;随后经过自来水充分冲洗，使用苏木精进行复染，然后脱水、封片。

1.3  统计方法

该研究数据的整理和分析采用SPSS 20.0统计学软件，计数资料用[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  两组患者的检出率比较情况

观察组患者检出例数为30例，占75.00%，对照组患者检出例数为20例，占51.28%，观察组检出率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=14.442，P<0.05），见表1。

2.2  两组患者恶性胸腹水上皮肿瘤标志物表达情况

观察组患者标本经过HE染色后背景较为明显，干净，肿瘤细胞异型性较为明显，呈腺管状和乳头状排列;转移性恶性胸腹水中的moc-31表现敏感，定位明确;在大部分腺癌中CEA具有较高的表达水平，染色背景较重。

3  讨论

恶性胸腹水在临床较为常见，是发生在全身性癌变或者胸腹腔恶性肿瘤所引起腹腔脏壁层和胸腔内的弥散性病变[7]。这样的病变导致体腔液体异常增长，被称为恶性胸腹水[8]。其发生机制复杂，与血管内外液体交换、体内外液体交换失衡有关系。患者呼吸功能因为胸腹水异常剧烈增长而受到影响，循环系统正常运行受到损伤，严重的患者可能发生死亡。临床上通过腔引流术或者胸腔引流术针抽取晚期肿瘤合并恶性胸腹水患者的胸腹水，进行常规病理涂片检查，做出诊断。但是，常规细胞学涂片内的细胞核容易发生重叠，有的涂片太厚，诊断结果受到影响。同时，受到取材限制，经过多次涂片才可以检出异常的细胞，同时根据异常细胞不能诊断恶性肿瘤细胞，增加涂片难度，引起细胞发生变形，免疫组化鉴别受到阻挠。恶性胸腹水的明确诊断较为复杂。恶性胸腹水临床诊断常选用细胞学检查，与正常细胞相比容易脱落，可以通过多种方法获得组织颗粒或者瘤组织，进行性质鉴定。利用穿刺法采集深在的瘤细胞，利用印片法收集浅表瘤体表面的细胞，利用拉网法收集胃、食管所脱落的细胞，而腹腔冲洗液、胸水、痰以及腹水內的细胞的收集可用浓集法，该种方法可因为各种因素破坏恶性肿瘤细胞并将分化良好的腺癌细胞与增生细胞形态相混淆，或者脱落到浆膜腔中肿瘤细胞较少等现象，细胞学检查具有较低的灵敏度，影响诊断恶性胸腹水的临床效果。有研究显示，多种生化指标联合鉴别胸腹水性质，提高恶性胸腹水的准确度、特异度以及灵敏度，但是，该种方法只在肿瘤细胞脱落于浆膜腔积液或者胸腹腔积液内的的效果最佳[9]。

该研究显示经过细胞蜡块检查观察组检出率为75.00%高于对照组，这与黄榕芳等[10]的研究中，细胞蜡块组检出率78%高于常规细胞学检查组的结果一致;观察组患者经过细胞蜡块HE染色后背景较为干净，同时，肿瘤细胞异型性明显，呈腺管状和乳头状排列;转移性恶性胸腹水中的moc-31表现敏感，定位明确;在大部分腺癌中CEA具有较高的表达水平，染色背景较重。细胞病理学与组织病理学比较，传统细针吸取涂片存在缺点如下：难以还原组织学结构、难以进行特殊染色、样本量少以及无法重复切片等。主要用于恶性胸腹水筛查或者提供倾向性诊断依据。传统细胞学所存在的缺陷可通过细胞蜡块检查技术进行弥补，细胞蜡块检查具有多种优点如微创性、可重复切片、简便。细胞蜡块的临床意义如下：①细胞蜡块在检查肿瘤细胞可以观察到细胞分型，有助于患者后续治疗，细胞蜡块技术的准确性比脱落细胞学高，储存方便，诊断明确度高[11]。②细胞蜡块切片可以避免经过常规检查的恶性胸腹水患者因过氧化氢酶增多而产生泡沫引起脱片的现象。③细胞蜡块肿瘤标志物可以节省试剂，避免检查边缘现象的发生，检查准确性提高。

综上所述，细胞蜡块与常规细胞学检查相比，恶性胸腹水患者检出率明显提高，肿瘤病灶来源可以被确定，临床确诊率升高，帮助临床医师做到对症治疗，减少患者痛苦，值得临床推广应用。

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[9]  林菊. 胸腹水与血液中生化指标联合检测对良恶性胸腹水鉴别的诊断价值[J].中国继续医学教育，2016，8（10）：32-33.

[10]  黄榕芳，何诚，朱伟峰. 细胞蜡块技术与传统涂片技术在胸腔积液病理诊断中的应用效果比较[J].福建醫药杂志，2016，38（2）：94-96.

[11]  胡琼.细胞蜡块技术在胸腔积液诊断中的应用研究[J].世界最新医学信心文摘，2018，18（16）：158-160.

（收稿日期：2019-04-26）