葡萄籽中原花青素的提取及在护肤品中的应用

黄雪秋，韦有杰，谢彝健，马 璐

(百色学院预科教育学院，广西 百色 533000)

原花青素是一种新型美白抗氧化的天然植物提取物，是一种天然的抗氧化剂[1-3]。其被认定为当前世界上所能提取到的抗氧化与清除人体内自由基能力最强的物质[4-5]。在葡萄籽中提取的原花青素可以消除与抵抗人体产生的自由基，有效帮助人体对维生素的吸收，抗衰老，易被人体表皮吸收，使肌肤保持紧致水润，减少皱纹与角质的产生,含有原花青素的护肤品在与皮肤接触的同时收缩毛孔，紧致肌肤，从而使皮肤水润清爽不粗燥[6-7]。所以可以合理利用我国天然广阔的地理资源优势，开发出产各种含有原花青素的护肤品化妆品。

1 实验方法

1.1 葡萄籽原花青素的粗提取与吸光度测定

(1)葡萄籽粉碎→烘干→石油醚浸泡18h→抽滤→干燥→乙醇溶液浸提→抽滤→转蒸→粗提物

取粗提物1mL，加蒸馏水稀释并定容至250mL，测吸光度，记录211λnm的吸光度值。

1.2 纯化葡萄籽原花青素提取物

95%的无水乙醇浸泡D101大孔吸附树脂，静置24h后装柱，上样。依次用30%、50%、70%、90%的乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液旋蒸，得到纯化葡萄籽原花青素提取物。

1.3 原花青素面霜的配制

表1 面霜基质原料配比

表1(续)

加热搅拌溶解硬脂酸、硬脂酸甘油酯、氢化聚葵烯与尼泊金甲酯，之后依次加入二甲基硅油、合成角鲨烷、液体石蜡、苯氧乙醇，搅拌至均相，记为A相。黄原胶和卡波姆940加入到40℃温水中，搅拌至其充分溶胀，接着依次加入甘油、丁二醇、泛醇、三乙醇胺、EDTA Na与海藻糖搅拌均匀，记为B相。将A、B相混合搅拌均匀后，再分别等量加入10%的抗坏血酸、粗提葡萄籽原花青素和纯提葡萄籽原花青素，加纯净水至100g，搅拌均匀，之后进行面霜基础理化指标和稳定性试验，得到三种符合标准的抗氧化型面霜。

1.4 纯提葡萄籽原花青素面霜自由基清除率的测定

取0.1g护肤品基质和面霜分别稀释至100mL，之后进行紫外吸光度的测定。

①取纯提原花青素面霜稀释液2mL+2mL蒸馏水测基线。

②取面霜基质稀释液2mL+2mL70%无水乙醇DPPH溶液测定空白吸光度取波峰517λnm的数值记为A空白。

③取纯提原花青素面霜稀释液2mL+2mL70%无水乙醇DPPH溶液测样品吸光度同取波峰为517λnm的数值记为A样品。

1.5 对比三种面霜体外清除DPPH自由基的能力

取4支10mL毫升的玻璃试管，一支添加2mL葡萄籽粗提物护肤品稀释液，一支添加稀释后的抗坏血酸溶液2mL，另一只添加2mL葡萄籽纯提物护肤品稀释液，最后一支做对照组添加4mL的DPPH稀释液；往前三支试管各加2mL DPPH稀释液，观察溶液的变化情况。

2 实验结果与分析

2.1 乙醇体积分数对葡萄籽粗提物吸光度的影响

图1 无水乙醇浓度与吸光度关系线性图

图1可以看出乙醇浓度为60%时，葡萄籽粗提物吸光度，说明该浓度乙醇最利于葡萄籽原花青素的提取。造成此结果的原因可能是葡萄籽中的物质在此浓度时趋于饱和溶解状态，且葡萄籽内的某些物质是需要蒸馏水溶解出的，水浴乙醇协同才能能好地将葡萄籽中的原花青素浸提出来，而更高浓度的无水乙醇溶液中蒸馏水的比例相应减少，水所能溶解出葡萄籽中物质变少，所以在比60%更高浓度的无水乙醇溶液的吸光度下降。

2.2 搅拌温度对葡萄籽粗提物吸光度的影响

图2 搅拌温度与吸光度关系线性图

葡萄籽中溶解的物质不仅与乙醇浓度相关，也与加热搅拌时的温度有关，从图2可以看出，相同条件下，搅拌温度为60℃时最有利于葡萄籽原花青素的提取。过低的温度无法有效断裂葡萄籽中的氢键，使葡萄籽中的多酚物质不能溶到溶液中，由图可看出葡萄籽在60%乙醇浸提溶液中的搅拌温度为60℃时，所得粗提取的吸光度最高；温度过高，葡萄籽中的多酚物质在高温状态下会遭到破坏，在搅拌温度为65℃时葡萄籽粉末中可能有少量的物质遭到破坏无法更完全的提取而出，从而吸光度相应下降。

2.3 搅拌时间对葡萄籽粗提物吸光度的影响

图3 搅拌时间与吸光度关系线性图

由图3可得，搅拌时间为90min时所测得的吸光度曲线最好，原因可能是搅拌时间少的情况下葡萄籽中的物质在溶液中溶解不完全，在图中60min比30min吸光度曲线高可以说明，而在超过90min时，长时间的高温也会使溶解后的物质被破坏，而在150min分钟时再次增高，可能的原因是溶解出了葡萄籽中多酚以外的物质，这些多溶解的物质在溶液中，在后来测曲线的时候还依旧存在，即造成吸光度增高。

综上，当浸提溶液浓度为乙醇60%、搅拌温度为60℃、浸提时间为90min时，葡萄籽粗提物的吸光度值最高，即该提取条件为较优的葡萄籽原花青素提取条件。

2.4 纯提葡萄籽原花青素面霜的DPPH自由基清除率

记录实验数据得到A空白=0.317，A样品=0.015；由自由基清除率计算公式得：清除率=(1- A样品/A空白)%得(1-0.317/0.015)%≈95.3%。

2.5 对比三种抗氧化型面霜的体外自由基清除能力

图4 粗提物、维生素C、纯提物清除自由基对比图

图4的试管从左至右分别为添加粗提物、抗坏血酸、纯提物、DPPH稀释液。由上图的变色情况可分析得出，葡萄籽纯提物的清除自由基能力最强，抗坏血酸清除率比葡萄籽粗提物强。

3 小结

由本实验得出葡萄籽中原花青素的提取率与溶液浓度，搅拌温度，搅拌时间都相关，最佳的提取条件为60%乙醇浓度，60℃的搅拌温度，90min的搅拌时间。且最后自由基清除率排行为纯提物>维生素C>粗提物。所得原花青素面霜经试验，其理化性质稳定，无不良反应，可安全作用于人体表皮。