复方交泰汤对心肾综合征模型大鼠心功能的影响

心肾综合征(cardiorenal syndrome，CRS)是指慢性心力衰竭(congestive heart failure，CHF)引起进行性肾功能损害，是CHF的终末期表现。中医认为CHF发展到终末期与心、肾两脏关系最为紧密。临床研究显示，中医经典的交通心肾法能够延缓心肾综合征进展[1-2]。本研究以单侧肾脏切除(UNX)联合冠状动脉结扎(MI)的方法制备心肾综合征大鼠模型，以交通心肾法代表方复方交泰汤为干预手段，观察复方交泰汤对心肾综合征大鼠心脏功能的改善作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级6周龄雄性SD大鼠70只，体质量200～250 g[北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2011-0012]。北京医科大学心血管病研究所动物室饲养，室温20～21 ℃，湿度50%。

1.2 药物 复方交泰汤由肉桂、黄连、猪苓、泽泻、滑石、生黄芪等组成中药免煎颗粒(江苏江阴天江药业有限公司)；奥美沙坦酯片[批号：SN071OA，第一三共(中国)投资有限公司赠予]20 mg。

1.3 试剂与主要设备 ALC-V9小动物呼吸机(上海奥尔特生物科技有限公司)；NANODROP 2000和MK3酶标仪(ThermoFisher公司)；CX50超声诊断仪(Philip公司)；ABI PRISM 7500 Fast Real-Time PCR System(Applied Biosystems公司)；B型钠尿肽(BNP)检测试剂盒(武汉优尔生商贸有限公司)；引物α-MHC-F：AGAAGGAGCAGGACACCAGC，α-MHC-R：GTGGGATA GCAACAGCGAGGC；β-MHC-F：AGGAACAGGCCAACACCAAC，β-MHC-R：CAAAGGCTCCAGGTCTCAGG；GAPDH-F：GGCACAGTCAAGGCTGAGAATG，GAPDH-R：ATGGTGGTGAAGACGCCAG TA(上海生工生物工程有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 模型制备 大鼠适应性饲养1周，参照文献[3-4]行右肾摘除术，1周后行左冠状动脉前降支结扎术制备心肌梗死模型。对照组只进行右肾摘除术和左侧开胸手术。常规饲养4周，评价造模是否成功。以大鼠出现倦怠、活动减少、反应迟缓、呼吸增快、食欲下降、稀便等表现，心脏超声左室射血分数(LVEF)<45%为造模成功标准。

1.4.2 分组 将大鼠随机分为4组，其中模型组、奥美沙坦酯组、复方交泰汤组每组20只；对照组10只。

1.4.3 给药方法 依据《中药药理实验方法学》体表面积剂量换算方法，奥美沙坦酯组灌服奥美沙坦酯，0.5 mg/100 g，每日1次；复方交泰汤组灌服复方交泰汤(蒸馏水溶解，60 ℃震荡，形成混悬液，浓度为2 g/mL)15 g/kg，每日1次；对照组及模型组灌服等量生理盐水，每日1次。周期为8周。

1.4.4 标本采集 疗程结束，小动物气体麻醉机麻醉大鼠，眼眶后静脉丛取血2 mL，3 000 r/min，离心15 min，分离血清；取出大鼠心脏，剥离心包、心房及右心室，盐水漂洗，称重，取大鼠非梗死区心脏组织置于冻存管液氮中保存。

1.4.5 心功能检测 按照试剂盒说明书操作步骤，应用MK3酶标仪检测血清BNP浓度；气体麻醉机麻醉大鼠，使用7.5 MHz超声探头，获取胸骨旁左室长轴二维图像及左室M型曲线，扫描速度100 mm/s，测量3个心动周期，得到左室收缩末内径(LVESD)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室短轴缩短率(LVFS)和LVEF。

1.4.6 组织mRNA测定 取大鼠非梗死区心脏组织1 g，液氮研磨粉碎，按照TRIZOL试剂说明书操作步骤提取总RNA，按照反转录试剂盒说明书合成cDNA，进行PCR检测，观察肌球蛋白(MHC)mRNA表达情况。

2 结 果

实验过程中对照组大鼠死亡2只，死亡率为20%；模型组大鼠死亡9只，死亡率为45%；奥美沙坦组死亡6只，死亡率为30%；复方交泰汤组死亡5只，死亡率为25%。

2.1 各组BNP及心功能指标比较(见表1)

组别只数BNP(ng/L)LVEDD(μm)LVESD(μm)LVEF(%)LVFS(%)对照组 81 493.7±331.175.65±13.4054.24±14.5859.18±12.6726.81±13.08模型组 111 356.7±501.296.25±21.371)76.63±21.931)48.55±12.821)7.61±11.651)奥美沙坦酯组14990.6±412.21)2)79.46±25.592)62.20±21.372)49.75±7.6113.70±10.822)复方交泰汤组151 058.3±338.51)2)86.15±15.102)65.06±15.812)54.71±12.942)16.45±13.422)

与对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

2.2 各组肌球蛋白mRNA表达水平比较(见表2)

组别α-MHCβ-MHCα-MHC/β-MHC模型组 1.25(0.48,1.78)0.86(0.41,3.27)1.11(0.28,3.75)奥美沙坦酯组2.85(0.51,5.09)0.35(0.11,3.63)2.70(0.43,8.93)复方交泰汤组0.76(0.35,2.16)0.47(0.80,3.59)1.92(0.34,7.00)

3 讨 论

文献及临床研究提示心肾综合征发病核心是心肾不交[5]。复方交泰汤以《韩氏医通》复方交泰丸加减合调阴阳，使心肾水火阴阳二气相交。临床研究证实能够延缓心肾综合征病人心肾功能的恶化，其可能机制是拮抗CHF进程中肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)和炎症反应[6]。目前认为RAAS过度激活是导致疾病进展的核心因素，除影响心室收缩力、心室重构，还能够启动血管、组织免疫炎症程序，而这二者的共同结局是心肾纤维化。本研究以RAAS拮抗剂奥美沙坦酯为阳性对照药物，观察复方交泰汤改善心肾综合征大鼠心脏功能的作用。

BNP是由心肌细胞合成的具有生物学活性的天然激素。当左心室功能不全时，由于心肌扩张，心脏容量负荷或者压力发生改变，心肌细胞释放的前脑钠肽原被迅速分解为有生物活性的BNP[7]，快速释放入血以维持循环系统压力、渗透压及容量的稳态。血清中BNP水平与慢性心力衰竭程度与时间呈正相关[8-10]。LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS是心脏超声直接反映心脏左室结构变化和收缩功能的指标，间接反映心室重构。本研究中，模型组LVEDD、LVESD高于对照组，LVEF、LVFS低于对照组(P<0.05)，说明单侧肾脏切除联合冠状动脉结扎方法复制心肾综合征大鼠模型的可重复性。治疗后，奥美沙坦酯组和复方交泰汤组BNP 水平降低，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，两组BNP水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示复方交泰汤能够改善心脏功能，与奥美沙坦酯作用相似。两组LVEDD、LVESD降低，LVEF、LVFS升高。说明经药物治疗的大鼠心脏有改善的趋势，BNP水平降低是心功能得到改善的结论，再次证实复方交泰汤在改善心脏结构与收缩功能方面与奥美沙坦酯作用相当。

肌球蛋白是重要的心肌收缩蛋白，成年大鼠心室肌以α-MHC为主，心力衰竭发生时β-MHC基因表达增加，使得β-MHC所占总肌球蛋白的比例增加。由于β-MHC与肌动蛋白的亲和力低于α-MHC，故以β-MHC为主的心肌收缩力减弱，收缩速度减慢。同时β-MHC升高与心房、心室内径显著正相关，故而认为其表达异常，还参与了心脏重塑[11-12]。本研究结果表明奥美沙坦酯能够上调心肾综合征大鼠心肌α-MHC mRNA水平，未明显降低β-MHC mRNA的表达，进而使得α-MHC/β-MHC升高。虽然心肾综合征大鼠经复方交泰汤治疗后α-MHC未见明显升高，但却见到β-MHC的下降和α-MHC/β-MHC升高的趋势，提示本方可能改善心肾综合征大鼠的心室重构。

综上所述，复方交泰汤能够改善心肾综合征模型大鼠心脏功能，降低心肾综合征模型大鼠血清BNP水平，与奥美沙坦酯作用相当，其机制可能是通过改善心室重构，尚待进一步验证。