HPLC测定山蜡梅叶及其制剂中6,7-二甲氧基香豆素含量

金贤武　黄平

【摘 要】目的：建立山蜡梅叶及其制剂中6，7-二甲氧基香豆素的HPLC含量测定方法。方法：采用Luna -C18色谱柱，以甲醇-0.1%乙酸水溶液（25：75）为流动相，等度洗脱，流速1.0mL·min-1，柱温35℃，检测波长340nm。结果：6，7-二甲氧基香豆素检测浓度在4.176～208.8μg·mL-1内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率、精密度、重复性、稳定性良好。结论：本试验所建立的方法准确可靠、重复性好，可为山蜡梅叶及其制剂的质量控制提供科学的依据。

【关键词】山蜡梅叶及其制剂;HPLC;含量测定;质量控制

中图分类号： S685.99 文献标识码： A文章编号： 2095-2457（2019）27-0212-001

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.27.095

山蜡梅（Chimonanthus nitens Oliv.），又名毛山茶，是江西的道地药材[1]。具有祛风解表、清凉排毒之功效[2]，其制剂临床上常用于治疗上呼吸道感染、小儿外感发热等疾病，民间也常用于泡茶以治感冒[3]。近年来，香豆素、黄酮及生物碱类成分不断从山蜡梅叶中被分离出[4]。本实验以6，7-二甲氧基香豆素为指标成分，建立了山蜡梅叶及其制剂6，7-二甲氧基香豆素的含量测定方法，为山蜡梅叶及其制剂的质量控制标准的提升奠定了基础。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent Technologies1200液相色谱仪（上海甄准生物科技有限公司）;CPA225D型十万分之一电子天平（德国赛多利斯）;KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

对照品：6，7-二甲氧基香豆素（批号111740-200702）购自中国药品生物制品检定所，山蜡梅叶（江西佑美制药有限公司，批号：20170905、20170904、20171116、zy0011712034、zy0011710026、zy0011710025），山蜡梅叶颗粒（江西佑美制药有限公司，批号：180302、1701011、1803022）;甲醇为色谱纯（Merck公司）;醋酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Luna -C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相甲醇-0.1%醋酸水溶液（25：75）;流速1.0mL·min-1，柱温35℃，检测波长为340nm;进样量10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取6，7-二甲氧基香豆素10.44mg至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成质量浓度为208.8μg·mL-1混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取山蜡梅叶及其制剂各约1.0g，置25mL量瓶中，加入甲醇10mL，称重，超声处理30min，冷却，称重，补失减重，即得。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2.1”h和“2.2.2”项下对照品溶液、供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。见图1。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取“2.2.1”项下对照品0.2、0.5、.1.0、2.0、5.0、10.0mL至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。分别精密吸取10μL注入HPLC分析，以峰面积Y对进样浓度X进行回归方程计算，得回归方程：Y=34.04X+3.01（r=0.9999）。表明6，7-二甲氧基香豆素在质量浓度4.176～208.8μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下对照品，按（下转第205页）（上接第212页）“2.1”项下色谱条件连续进样6次。结果6，7-二甲氧基香豆素的RSD为1.17%。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一批号（zy0011711030）供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在0、2、4、6、8、12、24h进样分析。结果6 ，7-二甲氧基香豆素的RSD为1.63%。表明样品24h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号（zy0011711030）样品，按“2.2.1”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析。结果6，7-二甲氧基香豆素的RSD为1.81%。表明方法重复性良好。

2.8 加样回收试验

取已知含量（zy0011711030）样品6份，每份约1.0 g，按约1：1的比例加入对照品，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，计算回收率，结果平均加样回收率为99.16%，RSD为1.75%。

樣品含量测定

取不同批次样品约1.0g，每个批次平行3份，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，以外标法计算含量，结果见上表1。

3 总结

目前对山蜡梅叶及其制剂的质量控制研究报道较少，质量标准项下含量测定主要以黄酮类成分为指标成分[5]，为全面反映制剂的内在质量，本研究选择了具有明确药理作用的香豆素类化合物6，7-二甲氧基香豆素为指标成分，建立了山蜡梅叶及其制剂中6，7-二甲氧基香豆素含量的测定方法，为进一步完善山蜡梅叶及其制剂的质量控制标准提供了依据。

【参考文献】

[1]李诒光，卢建中，陈杰，等.江西道地药材山蜡梅叶质量标准的研究[J].中草药，2010，41（5）：836-838.

[2]张尊敬，刘忠达.山腊梅的成分及药理作用研究近况[J].浙江中医杂志，2009，44（11）：849-850.

[3]李莎莎，舒任庚.山腊梅化学成分及药理作用的研究进展[J].华西药学杂志，2009，24（2）：198-200.

[4]黄赞兴，舒任庚.山蜡梅叶化学成分研究[J].中药材，2017，40（12）：2856-2858.

[5]聂韡，房海灵，黄丽莉.山蜡梅叶中3种黄酮类成分含量动态变化研究[J].江西农业大学学报，2013，35（2）：357-360.