羟苯磺酸钙对干化学和湿化学酶法检测肌酐的干扰分析

张锡波 何慧君 叶旭鑫 吴志锋 张凤宜 万志鹏

（东莞市人民医院检验科 广东 东莞 523000）

1.资料与方法

1.1 标本来源

收集无溶血、黄疸和脂血的病人及健康体检者的新鲜血清制作成5种不同肌酐浓度的混合血清样本。

1.2 干扰物

羟苯磺酸钙胶囊厂家为上海朝晖药业有限公司，包装规格为10粒/板/盒，每粒含羟苯磺酸钙0.5g（按C12H10CaO10S2计）。

1.3 仪器试剂

仪器使用Beckman Coulter的AU5831生化分析仪，试剂为配套的Beckman Coulter公司肌氨酸氧化酶法试剂，货号OSR61204，规格为4×45mL R1,4×15mL R2。干化学使用仪器为强生Ortho-Clinica Diagnostics VITROS 5600生化分析仪(以下简称强生V5600),试剂使用配套的试剂（300测试/盒）。校准品使用配套校准品，Beckman Coulter质控是原厂质控，强生V5600使用第三方朗道质控。

待测样本配制：根据羟苯磺酸钙药物特性，峰值浓度一般为8～15μg/ml[2]，因此配制时应包含该浓度范围。先配制3种不同药物浓度的贮存液A（400μg/ml）、贮存液B（1000μg/ml）、贮存液C（2000μg/ml），收集5种肌酐浓度的混合血清，并配制成一系列不同药物浓度的待测血清，尽可能不影响基质情况下，加入物应小于5%，各种肌酐浓度样本配制方法相同，最终配制40个检测样本。

1.4 重复次数确定

首先参考美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求肌酐的可接受范围为15或%26.5μmol/L（取大者），因此设定实验的最大允许干扰值dmax为对照均值的7.5%或13.25μmol/L（取大者）。重复测定10次对照样本得出批内标准差s，计算各浓度样本的dmax/s均大于3，查表可确定应重复检测的次数为3次。

表1 AU5800上羟苯磺酸钙对肌酐检测干扰值dobs

表2 强生V5600上羟苯磺酸钙对肌酐检测干扰值dobs

1.5 方法

根据CLSI EP7-A2文件的实施方案要求，分别进行配对试验和剂量效应试验。分别在AU5800和强生V5600上对配制好的样本进行检测，各测定3次，取平均值。

1.6 数据分析

计算干扰值dobs和干扰效应的95%可信区间(CL),dobs为测试样本均值和对照样本均值之间的差值,计算dobs±t0.975,n-1s√￣2/n,如果其范围不包括0，则可判断对检测结果有干扰，如dobs大于dmax则存在明显干扰。

2.结果

2.1 BECKMAN AU5800低浓度样本（70.3μmol/L）受干扰严重，不同浓度羟苯磺酸钙对肌酐检测干扰值见表1、表2。

图1 AU5800上羟苯磺酸钙对肌酐检测干扰效应曲线

图2 强生V5600上羟苯磺酸钙对肌酐检测干扰效应曲线

3.讨论

目前，我国检测肌酐的主要方法有碱性苦味酸法和肌氨酸氧化酶法[3]，但由于碱性苦味酸法的特异性不好，试剂稳定性差，定标周期短等缺点，因此现在多数检验科都选择肌氨酸氧化酶法作为检测肌酐的常规方法，其具备特异性高和干扰因素少、不会产生有毒物质等优点，有利于快速自动化分析仪的检测。它的原理是肌酐被肌酸酐酶水解为肌酸。生成的肌酸被肌酸酶水解为肌氨酸和尿素。肌氨酸氧化酶促进肌氨酸的氧化性脱甲基作用，产生氨基乙酸、甲醛和过氧化氢。过氧化物酶(POD)的出现，使已产生的过氧化氢和N-（3-磺丙基）-3-甲氧基-5-甲基苯胺(HMMPS)以及4-氨基安替吡啉起定量氧化缩合反应，产生蓝色色素，肌酐浓度与在600/700nm处吸光率的变化成比例。干化学法与其不同的是色原不同。

羟苯磺酸钙是一种改善微循环的血管保护药，化学名称为2，5一二羟基苯磺酸钙一水合物，常用于治疗糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、其他原因所致的慢性肾功能衰竭及冠心病等疾病。其机制是可降低毛细血管通透性，增强抗氧化能力，改善淋巴回流，减少血管内膜损伤；降低血液黏稠度，调节纤溶系统和凝血系统等机制，防止血栓形成，从而保护血管[4-5]。健康人单次服用500mg羟苯磺酸钙后血药浓度达峰时间为3～6小时，峰值浓度约8～15μg/ml,消除半衰期约在5小时左右。正常用量（每天1.0～1.5mg/日，分2～3次），6小时血药浓度稳定，GFR正常的病人24小时血药浓度均在6μg/ml以上。