羊肚菌液体发酵的集硒特性及生物活性物质研究

向戌莲 周大寨 冉青 刘信平 张驰

摘要：【目的】研究羊肚菌液体发酵培养条件，以及随硒浓度变化菌丝中活性物质的变化规律，为羊肚菌的集硒特性及其生物活性物质研究提供参考依据。【方法】以亚硒酸钠为无机硒源，以羊肚菌菌丝将无机硒转化为有机硒的硒源利用率为评价指标，采用正交试验对液体培养条件进行优化。利用水提醇沉法和Sevage法对多糖进行提取及纯化，蛋白质采用磷酸缓冲液提取，并对不同溶解性蛋白进行提取，以硫酸铵沉淀和透析法进行纯化;使用原子荧光法测定硒含量。采用试剂盒测定菌丝总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、过氧化物酶（POD）活性、多酚氧化酶（PPO）活性及脯氨酸（Pro）含量。【结果】羊肚菌菌丝富集有机硒深层发酵的最佳培养条件为：硒浓度25 μg/mL、培养温度24 ℃、培养时间5 d、装液量200 mL，在此条件下，亚硒酸钠转化为菌丝有机硒的硒源利用率为1.85%。4个因素影响排序为：硒浓度>培养天数>培养温度>装液量。硒浓度为20 μg/mL时多糖集硒效果较好，硒浓度为30 μg/mL时蛋白集硒效果较好。碱溶性和盐溶性蛋白的集硒能力更强，且集硒蛋白大多在30%硫酸铵饱和度时沉淀。相较于未加硒组（0 μg/mL），加硒组菌丝有更强的抗氧化活性。硒浓度在50 μg/mL以内，硒浓度的增加促使T-SOD活力不断增强;硒浓度的增加则抑制POD活性，但硒浓度超过30 μg/mL后POD活性略有回升;硒浓度对PPO活性有一定的抑制作用，且随硒浓度的增加呈先升后降的变化趋势。补硒能提高菌丝Pro含量，从而提高抗逆性，但超过30 μg/mL也会对其抗逆性产生负面影响。【结论……