GeneXpert 分子诊断技术在疑似结核感染患者中的应用价值分析

王怡悦 管桂波 陈红丹

（1 龙泉市人民医院检验科 浙江 龙泉 323700）

（2 龙泉市人民医院药剂科 浙江 龙泉 323700）

（3 龙泉市人民医院内科 浙江 龙泉 323700）

肺结核是一种长期危害人类健康的传染性疾病，该疾病主要由结核杆菌所引发，侵害人体健康。当人体感染肺结核后，如不及时治疗或彻底治疗则会给人类健康造成极大危害，甚至致呼吸衰竭或死亡[1]。肺结核主要通过呼吸道进行传播，尤其是艾滋病患者和老年人等免疫力低下人群。早期诊断、及时治疗是改善患者预后的关键，以往临床诊断主要以结核菌培养、痰涂片为主，而该类方法的局限性在于痰液的标本，如果不是深部咳出的痰，或患者吐得是口水痰，唾沫，再加上技术的局限性，技术人员的主观性，对结果的阳性率大大减低；且该方法检测所需时间较长[2]。近年来，随着临床分子生物学技术的发展，GeneXpert 检测技术得到快速发展和应用，GeneXpert 分子诊断技术只需2 小时就能出检测结果，对患者和医生都是一个福音[3]。本次研究为探讨GeneXpert 分子诊断技术应用于临床诊断结核病患者的效果。报告如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年9 月—2020 年3 月于医院治疗且胸片提示感染的患者或痰培养为阴性又提示肺部感染的患者100 例。入选者获悉研究相关内容，并签署知情同意书，自愿参与研究，医院伦理委员会批准。排除其他感染性疾病、血液系统疾病、精神疾病、肺部肿瘤等。男性55 例、女性45 例；年龄50 ～78 岁，平均为(63.7±3.7)岁。

1.2 检测方法

采集研究对象痰液标本，并采用痰涂片法、GeneXpert 分子诊断技术、结核分枝杆菌分离培养检测，此外，采用GeneXpert分子诊断技术和比例法药敏试验检测利福平耐药情况。

痰涂片法：采集研究对象痰液标本，然后进行涂片、染色、抗酸杆菌镜检。阳性：镜检下可见抗酸杆菌。

结核分枝杆菌分离培养：采集痰液标本1ml，然后根据说明书执行操作。

比例法药敏试验：对培养结果为阳性者采用比例法开展药敏试验，将待测菌制备成10-2g/L、10-4g/L 菌悬液，采用划线法均匀接种到对照、含利福平的培养基表面，接种时尽量做到菌液分布均匀。于37℃环境下培养4 周，然后计算菌落数。

GeneXpert 分子诊断：GeneXpert 分子诊断仪器，留取患者痰液1ml，并放置于无菌试管中，然后加入消化液2ml，并涡旋振荡20s，于室温下静置15min，再次加入2ml 处理液进行检测。

1.3 观察指标

对比不同检查方法检出阳性率和利福平耐药检出情况。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS25.0统计学软件分析处理，计数资料采用率（%）表示，行χ2检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 不同诊断方法检出结核杆菌阳性情况

GeneXpert 分子诊断技术检出结核分枝杆菌阳性率显著高于痰涂片检查方法，χ2=15.31，P=0.00；而与结核分枝杆菌分离培养相比较，无显著差异（χ2=0.36，P=0.47）；见表1。

表1 不同诊断方法检出结核杆菌阳性情况[n(%)]

2.2 GeneXpert 分子诊断技术检出利福平耐药率与比例法药敏实验结果比较

GeneXpert 分子诊断技术检出利福平耐药率与比例法药敏实验结果无显著差异（χ2=0.57，P=0.39）；见表2。

表2 GeneXpert 分子诊断技术检出利福平耐药率与比例法药敏实验结果（n）

3.讨论

长期以来，我国一直是结核病高负担国家，随着结核感染患者人数的增加，结核病耐药情况也越发严重，这不仅增加患者痛苦，还给家庭、社会带来极大的压力和负担，因此早期诊断、合理治疗对改善患者病情和预后具有积极作用。肺结核是长期严重危害人群健康的慢性传染病。由结核杆菌引起，主要侵害人体肺部，发生肺结核。肺结核在我国法定报告甲乙类传染病中发病和死亡数排在第2 位。得了肺结核如发现不及时，治疗不彻底，会对健康造成严重危害，甚至可引起呼吸衰竭和死亡，同时给患者和家庭带来沉重的负担。肺结核主要通过呼吸道传播，人人都有可能被感染。艾滋病毒感染者、免疫力低下者、糖尿病病人、尘肺病人、老年人等更是容易发病的人群。因此急需一种更快速和更可靠的实验室诊断方法辅助临床的需求与诊断。各学者[4]认为早期诊断、合理治疗是有效控制结核病的关键。现在目前检测结核菌感染的手段主要是痰涂片，结核菌培养。它的局限性在于痰液的标本，如果不是深部咳出的痰，或患者吐得是口水痰，唾沫，再加上技术的局限性，技术人员的主观性，对结果的阳性率大大减低。结核培养又因为结核菌自身分裂的时间限时，一般结果液体培养要7 ～8 天，固体培养要4 周，检测结果无法满足临床，而GeneXpert 分子诊断技术只需2 小时就能出检测结果，对患者、对医生都是一个福音。

WHO 推荐使用Xpert MTB/RIF 试验诊断肺结核，并选择性的测试标本以诊断肺外结核。自2007 年以来，WHO 已批准了基于不同原理的结核病诊断技术，并在实验室网络体系的框架内为每种诊断技术明确了合适的应用定位。从本次研究结果来看，采用GeneXpert 分子诊断技术具有较好效果，且可达到与比例法药敏试验、分离样本培养相当的效果。既往研究认为痰涂片培养阳性率在50%左右，而分离样本培养阳性率在60%左右[5]。由此可见传统诊断方法中存在较高误诊率，从而影响临床治疗方案的制定。本次所采用的GeneXpert 分子诊断技术是当前一种全新分子诊断技术，其可做到快速诊断。笔者分析认为GeneXpert 分子诊断技术主要是基于核酸扩增技术来设计，其根据rPoB 基因来设计5 对探针扩增81bp 利福平耐药决定区，检测核酸类型为DNA，因此具有较高诊断价值[6]。然本次研究中发现GeneXpert 分子诊断技术诊断阳性率并非100%，笔者分析认为GeneXpert 分子诊断技术在诊断过程中受人为因素和环境污染等因素影响，如制备菌液时出现交叉污染则可能会致菌落死亡，进而难以区别活菌与死菌，最终影响诊断阳性率。早期诊断和药敏试验对指导临床制定治疗方案具有重要意义，本次研究中发现GeneXpert 分子诊断技术可取得与比例法药敏试验相当的效果，但传统药敏试验所需时间更长，因此对临床治疗造成不利影响[7-8]。而采用GeneXpert 分子诊断技术可更早掌握患者耐药情况，有利于医生尽早进行治疗，从而控制耐药结核病的传播。

综上所述，GeneXpert 分子诊断技术应用于临床诊断结核感染具有较高诊断价值，可该方法快速，因此具有应用价值。