两种肉骨粉蛋白含量检测方法的比较研究

盛东峰

（周口师范学院，河南 周口466000）

肉骨粉是动物屠宰加工过程中的下脚料，产品蛋白含量高，氨基酸组成比较合理［1］，是一种公认的优质动物蛋白原料，适于与植物性蛋白搭配使用，降低生产成本，提高企业生产效益。

硫酸铜—氢氧化钠法是测定饲料真蛋白比率的国际标准方法，它准确性高、精确度好，常常被应用于肉骨粉的蛋白含量测定，但这种方法耗时耗力、测定成本较高。三氯乙酸法是企业内部经过长期实践总结出的一种简易方法，具有操作简单、实用性强的优点。该研究拟用硫酸铜—氢氧化钠法和三氯乙酸法两种方法对5 种肉骨粉的真蛋白比率进行测定分析，以期为肉骨粉蛋白含量的测定检验提供高效的方法。

1 检测原理

硫酸铜—氢氧化钠法和三氯乙酸法都是利用饲料样品在热水溶液中，非蛋白态的含氮化合物被溶解，同时浸出蛋白质加入过量的蛋白质沉淀剂，蛋白质被沉淀而形成不溶于热水的化合物的特点，通过冲洗、过滤使真蛋白质沉淀下来。然后，再将沉淀物用凯氏定氮法测定出真蛋白的含量［2］。

2 材料与方法

2.1 试验样品

5种肉骨粉购自农资市场。

2.2 试验仪器

研钵、孔径0.45 mm 分样筛（40 目）、分析天平（感量0.000 1 g）、高温炉、电炉（1 000 W）、滴定管（酸式，50 ml）、凯氏烧瓶（250 ml）、凯氏蒸馏装置、锥形瓶（250 ml）、容量瓶（100 ml）。

2.3 试验试剂

硫酸（化学纯）；硫酸铜溶液（10%水溶液，W/V）；氢氧化钠溶液（40%水溶液，W/V）；硼酸溶液（2%水溶液，W/V）；氢氧化钠溶液（2.5%水溶液，W/V）；氯化钡溶液（5%水溶液W/V）；盐酸溶液（2 mol/L）；三氯乙酸溶液（10%水溶液）；甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液；盐酸标准溶液（0.05 mol/L）；蔗糖。

2.4 硫酸铜—氢氧化钠法蛋白含量测定

称取试样1～2 g（精确到0.1 mg）于200 ml 烧杯中，加蒸馏水50 ml 煮沸，加入10%的硫酸铜溶液20 ml 和2.5%的氢氧化钠溶液20 ml，边加边搅拌，加完后继续搅拌1 min，放置2 h 以上或静置过夜，沉淀物过滤，用70 ℃以上热水反复洗残渣，直至滤液无SO42-为止（取5%氯化钡试液5滴于表面皿中，加2 mol/l盐酸1滴，滴入滤液，在黑色背景处观察无白色沉淀）。将滤纸与残渣包好，放入烘箱，75 ℃干燥2 h。后续步骤参照粗蛋白的测定［3］。

2.5 三氯乙酸法蛋白含量测定

称取1.5 g 试样（精确到0.000 1 g），加适量三氯乙酸（10%水溶液，要求三氯乙酸的质量为样品质量的5倍），搅拌净置10 min，全部转移到漏斗中过滤，并用三氯乙酸溶液洗涤滤渣2遍，于105 ℃下烘干，小心折叠放入250 ml凯式烧瓶，按凯氏定氮法测定蛋白含量［4］。

真蛋白比率（%）=（真蛋白含量*100）/粗蛋白含量。

3 结果与分析

硫酸铜—氢氧化钠法和三氯乙酸法分别对5 种肉骨粉样品的真蛋白比率的测定结果见表1。

表1 两种方法真蛋白比率测定结果

三氯乙酸法和硫酸铜—氢氧化钠法的测定结果统计分析见表2。

表2 两种方法结果统计处理

由表1和表2可以看出：硫酸铜—氢氧化钠法和三氯乙酸法所测结果的精确度均较好，两者测定结果的标准差0.11、变异系数0.22，均符合国际标准的误差规定要求。结果显示三氯乙酸法所测结果比硫酸铜—氢氧化钠法低约0.49个百分点，分析其原因可能与肉骨粉蛋白质的沉淀时间不够充分有关，硫酸铜—氢氧化钠法蛋白质的沉淀时间≥2 h，而三氯乙酸法仅仅静置10 min［5］。总体而言，三氯乙酸法有使用方便、操作简单、节约试剂、成本低等优点，可大大减少试验耗时，提高实验室工作效率。

该试验对常用的硫酸铜—氢氧化钠法和三氯乙酸法两种测定饲料原料蛋白质的方法进行了比较研究，结果表明，两种方法都能很好地测定肉骨粉中真蛋白比率，和国标硫酸铜—氢氧化钠法相比，三氯乙酸法具有省时省力、成本低效益高的优点，可以在试验室推广应用。