联合检测E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320表达水平在评估宫颈癌患者预后中的价值

刘文博，封全灵

（郑州大学第三附属医院(河南省妇幼保健院)妇产科，河南 郑州 450052）

宫颈癌是临床较为常见的妇科肿瘤疾病[1]，随着女性两癌筛查项目的不断推广,宫颈癌的早期发现和早期诊断能力显著提升,其发病率和死亡率呈现明显下降趋势[2,3]。目前，临床上多采用新辅助化疗(Neoadjuvant chemotherapy，NAC)手段进行治疗，由于患者的个体差异性,每位患者对化疗的治疗反应不尽相同，所以，早期对患者进行的疗效进行评估，及时调整化疗方案，对于患者的预后具有积极的意义[4]。上皮性钙粘附蛋白(E-cadhexin)是上皮细胞向具有活性的间质细胞的重要标志蛋白[5]。叉头框蛋白 (Forkhead box protein M1，FOXM1)的异常表达与患者的有丝分裂锤体缺陷、有丝分裂延迟以及异常具有相关性。内源性非编码小分子RNA320属于肿瘤移植性miRNA,通过对患者的肿瘤血管形成的抑制作用,进而抑制患者的肿瘤的发生发展[6]。本研究将通过分析联合检测E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320表达水平在评估宫颈癌患者预后中的价值，为临床治疗和诊断提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以郑州大学三附院2015年1月至2018年1月收治的200例宫颈癌患者为研究对象,另选同期于我院门诊或病房行阴道镜及组织活检后病理结果阴性者200例为对照组研究对象。根据患者的宫颈癌淋巴转移情况、肿瘤浸润情况、以及脉管受损情况，将患者分为高、中、低风险3组，其中，高风险组患者是指患者有淋巴结转移、宫旁浸润，中风险组患者表现为间质浸润深度在10mm以上，同时累及脉管；低风险组患者表现为均无淋巴结转移、宫旁浸润、间质浸润深度在10mm以内。本研究中，低风险组患者59例，中风险组患者78例，高风险组患者63例。宫颈癌组患者和健康组的年龄、体重指数之间的差异不存在统计学意义。本研究获得我院伦理委员会批准，所有研究对象已签署知情同意书。

纳入标准：⑴宫颈癌组患者均经过病理诊断，符合宫颈癌及癌前病变规范化诊疗指南(试行)[7]中关于宫颈癌的诊断标准;⑵宫颈癌组患者均为首次确诊为宫颈癌；⑶对照组研究对象的血细胞计数、肝肾功能、血脂等均正常。排除标准：⑴合并妊娠者;⑵入院前3个月内进行过免疫抑制相关治疗者；⑶合并其它部位恶性肿瘤或代谢性疾病（如糖尿病等）；⑷入院前进行过放疗或化疗者等。

1.2 研究方法

1.2.1 miR-320表达水平检测 应用宫颈采样器于研究对象宫颈口顺时针旋转3～5圈后,立即置入含有保护剂的试管,操作中避免血液及其他宫颈分泌物污染，4℃下保存，14d内进行检测。采用第二代杂交捕获技术（HC2）检测研究对象的miR-320表达水平。

1.2.2 E-cadherin、FoxM1蛋白水平检测 采集患者的宫颈组织进行石蜡包埋，4μm连续切片，采用免疫组化法对以上样本进行E-cadherin、FoxM1蛋白水平检测。

1.3 观察指标

1.3.1 疾病组与健康组患者E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平对比 分别对疾病组和健康组患者以及不同风险疾病组患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平对比。

1.3.2 疾病组患者的预后与E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相关性分析 使用spearman分析法,对疾病组患者的预后与E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相关性分析。

1.3.3 疾病组患者的多因素分析 使用logistic回归分析,对不同预后组患者的疾病组患者的预后与E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平进行多因素分析。

1.3.4 单独检测和联合检测的诊断效能对比观察分别对E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的单独检测和联合检测的诊断效能对比观察。

1.4 统计学方法 数据分析采用SPSS20.0进行，计数资料以[n（%）]表示，使用卡方检验比较，等级资料使用秩和检验，计量资料以(x±s)表示，两个组间的均数比较采用独立样本的t检验,多组比较使用方差分析,联合检测和单独检测效能对比使用ROC曲线分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 疾病组与健康组患者 E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平对比 疾病组患者的E-cadherin、miR-320水平显著低于健康组，FoxM1蛋白水平显著高于健康组，通过两两比较，随着患者的预后不良风险的升高,患者的E-cadherin、miR-320水平呈下降趋势，FoxM1蛋白水平呈上升趋势，差异具有统计学意义，见表1。

表1 疾病组与健康组患者E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平对比

2.2 疾病组患者的预后与E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相关性分析 通过对疾病组患者的预后与E-cadherin、miR-320水平的相关性分析,疾病组患者的不良预后与E-cadherin、miR-320水平呈负相关，FoxM1水平与患者的不良预后呈现正相关,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 患者的预后与E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相关性分析

2.3 疾病组患者的多因素分析 E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平与病情严重程度进行多条件多因素Logistic回归分析，发现E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平均为宫颈癌不良预后的独立危险因素，见表3。

表3 疾病组患者的多因素分析

2.4 单独检测和联合检测的诊断效能对比观察经ROC曲线下分析,联合检测患者的诊断效能高于单独检测，其灵敏度高于单独检测。低风险组患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平临界值分别为1.77,1.32,1.08；中风险组患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平临界值分别为1.53,1.36,0.55；高风险组患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平临界值为1.45,1.41,0.31，差异存在统计学意义（P＜0.05）。 见表 4。

表4 联合检测与单独检测对各组患者的检测效能对比

3 讨论

宫颈癌是临床妇科的一种常见肿瘤,发生于女性生殖系统，其发病率与病死率均较高，据有关统计[8]，在发展中国家宫颈癌在女性恶性肿瘤的发病率中仅次于乳腺癌，死亡率仅次于乳腺癌与肺癌，我国每年新发病例约有10万，占世界新发病例的1/5[9]。宫颈癌早期筛查可早期发现病例，积极治疗，对于提高宫颈癌患者的生活质量及生存时间均具有重要意义。

本研究中,疾病组患者的E-cadherin、miR-320水平显著下降，FoxM1蛋白显著升高。分析认为，E-cadherin是由于公认的肿瘤细胞浸润抑制编码基因CDH1[10]，而E-cadherin主要可通过对胞内区与连环素β-catenin形成复合体，在患者的肌动蛋白细胞骨架中进行表达[11]，对于为此上皮细胞的稳定性和粘附作用具有积极的意义。而随着患者的E-cadherin表达水平降低,患者的复合体解散，随着E-cadherin水平降低,患者的肿瘤细胞侵袭迁移作用随之升高，有研究报道显示[12]，E-cadherin水平的降低与宫颈癌患者的淋巴结转移具有积极的意义，所以，随着患者的E-cadherin水平降低，患者的不良风险水平随之升高。FoxM1可直接作用于患者的细胞周期靶点,在细胞周期的G2/M期，Fo xM1可通过对患者的细胞周期进行调控,促使环氧化酶升高,从而促进患者肿瘤的发生。同时，FoxM1可以促使患者的血管内皮生长因子水平升高，促进患者的胃癌发生基因的表达。有研究报道显示[13]，E7癌蛋白可能是宫颈癌形成的重要原因之一，FoxM1可通过对患者的C-MYC基因的激活，增加患者的细胞对生长因子的敏感性，促进患者的肿瘤发生。miR-320是一种非特异性促肿瘤细胞生长因子基因,具有促进血管生成、增加细胞的侵袭性、促进肿瘤细胞的增殖分化等作用,且还通过JAK/STAT、HIF、TGF-β等通路参与肿瘤的侵袭、转移等。亦可通过活化G蛋白偶联受体Che mR23，趋化不成熟的树突细胞、巨噬细胞到达肿瘤部位，参与肿瘤细胞的免疫过程；与内皮细胞膜上的CMKL R1受体集合,起到诱导内皮细胞增殖和促进新生血管丛形成的作用,促进肿瘤细胞的增值生长。所以随着患者的预后不良风险的升高，患者的E-cadherin、miR-320水平呈下降趋势，FoxM1蛋白水平呈上升趋势。杨建敏等[14]通过对患者的FoxM1蛋白水平与宫颈癌分期的相关性研究中指出，随着患者的病情严重程度升高,患者的FoxM1蛋白水平随之升高。邓秀文等[15]通过对E-cadherin与患者的预后的研究中得到,随着患者的E-cadherin表达水平下降，患者的病理程度随之上升。宋成等[16]通过miR-320水平在宫颈癌患者的研究中指出,宫颈癌患者的miR-320水平与患者的病理状态呈现负相关，与本研究相互印证。

另外,本研究以预后风险作为金标准,对E-cadherin、miR-320、FoxM1检测用于宫颈癌不良风险进行分析发现，三者的灵敏度、特异度及准确度均不高,尚不足以作为单独检测诊断宫颈癌的依据。通过分析联合检测的诊断效能发现，敏感度与准确度均高于三者平行联合检测,特异度则相差无几,同时系列联合检测的ROC曲线下面积高于平行联合检测,因此三者系列联合检测诊断效能较高,具有较高的诊断价值，三者系列联合检测更加适用于宫颈癌的早期诊断。

综上所述，E-cadherin、miR-320、FoxM1 与宫颈癌的发生发展密切相关,三者系列联合检测均可提高预后预测效能，对于宫颈癌预后的早期诊断、及早干预具有积极意义。